Винкс рисунки по клеточкам: Как нарисовать Винкс поэтапно

Содержание

Как нарисовать Винкс поэтапно

В наши дни наверное не найти девочку, которой бы не нравились персонажи известного всем мультсериала «Winx Club». Сегодня мы научим вас рисовать красивую девушку в очень привлекательном наряде из этого мультика. Задание, конечно же, не простое, ведь некоторые героини мультфильма имеют довольно сложные наряды. На всех девушках одежда яркая и довольно контрастная.

Забегая наперед, хочется отметить, что детали одежды способны усложнить процесс рисования, однако нарисовать отличительную черту героинь мультфильма, а именно их фигуру не составляет большого труда. Фигура у девушек стройная, они напоминают фотомодели, правда, ноги героинь из Винкс излишне удлиненные. Но я считаю, что с рисованием этой части тела у нас проблем быть не должно, хотя учитывать данную особенность необходимо, иначе не удастся правдоподобно нарисовать Винкс.

Чтобы рисунок произвел особое впечатление, не забудьте раскрасить его. Сегодня мне хотелось бы научить вас рисовать одну из девочек и делать мы это будем поэтапно. Начнем прямо сейчас с помощью простого карандаша. Когда рисунок будет готов мы раскрасим девушку цветными карандашами. Если у вас появится желание раскрасить красками, то можете сделать это.

Рисуем контуры фигуры

Помните, что мы взялись за непростое задание, поэтому максимально сосредоточьте внимание и точно следуйте моим рекомендациям. Для начала вам необходимо разделить лист бумаги на равные участки. Пусть их будет четыре – это позволит нам с точностью передать на бумаге контуры фигуры. Несмотря на то, что мы рисуем сегодня Флору, любую другую героиню вы сможете после нашего занятия нарисовать самостоятельно, так как они очень похожи между собой.

Контуры фигуры девушек следует изображать в виде окружностей, а также прямых линий. Вашим заданием является скопировать из моего рисунка контуры. Затем мы будем переходить ко второму этапу нашей работы.

Изображаем общий контур тела девочки

Этот шаг нам дается для того, чтобы научиться рисовать общий контур тела героини мультсериала. В общем это сделать не сложно, ведь вы уже имеете главные ориентиры, и теперь их необходимо лишь обвести. Вы должны передать на бумагу изящную фигуру девушки, поэтому рисуя линии нужно стараться сделать это как можно правдоподобнее. Талия у героини стройная, ноги длиннющие, обратите внимание, что они немного согнуты в коленках. Плечи девушки высоко поднятые. Теперь обводим контуры рук. Как вы знаете, все девочки мультсериала носят высокую обувь. Мы непременно нарисуем каблуки, но это будет позже, сейчас ваше задание нарисовать обувь без подошвы.

Рисуем девочек

похожими на нас

Этот этап нас вынуждает начать работу с удаления прежних контуров. Для этого их следует аккуратно стереть. Также ластиком удаляем квадраты, разделяющие лист бумаги. Теперь необходимо уточнить некоторые детали рисунка. Конечно же, героини Винкс придуманные и пропорции их тела немного искаженные, однако мы должны изобразить их похожими на нас. Вначале следует нарисовать девочке руки, затем сделать форму головы, она должна быть пропорциональной к телу. Все части тела Флоры на нашем рисунке должны выглядеть как у реальной современной девушки. Однако мы не должны забывать, что рисуем героиню мультсериала, поэтому изображаем крылья и необычно длинные ноги, таким образом, нам удастся максимально точно передать образ девушки.

Приступаем к рисованию элементов одежды нашей героини

Все мы знаем, что одежда девочек украшена декоративными элементами – это и банты, и рюши, и многочисленная бижутерия, различные крылышки и прочее. Мы оставляем выбор декоративных элементов за вами, так что сами решите какие украшения будете рисовать. Кроме того сами выбирайте их количество.

Если вам понравились украшения, изображенные на моем рисунке, вы можете скопировать их. При желании добавьте парочку элементов, по своему усмотрению. Теперь приступаем к главной задаче. Вам предстоит нарисовать лицо девочки.

Рисуем волосы героини

У Флоры очень длинные волосы, которые рисовать не сложно. Волосы распущенны, мы должны точно передать их длину, а она практически касается пола. Выбор формы волос остается за вами, но помните, что контурные линии рисуем волнистыми.

Продолжаем рисовать волосы

Так как волосы – главное украшение героини следует уделить им достаточно внимания. Нужно придать им натуральный вид, изобразив длинные и в то же время пышные локоны. Рисуем многочисленные завитушки.

Чем отличаются герои Винкс

Теперь мы будем рисовать главное отличие девочки от людей, а именно ее крылья. Они должны выглядеть прозрачными и легкими, как пух. Для начала нам следует изобразить на бумаге контур крыльев. Затем постепенно нужно добавлять внутренние контуры. Эти линии разделяют крылья на маленькие сегменты. Мы должны изобразить прожилки, напоминающие крылья стрекозы.

Раскрашиваем рисунок

Как нарисовать Винкс

Итак, рисунок выполнен, мы передали на бумагу все детали с максимальной точностью и подошли к ответственному моменту. Теперь беремся за раскрашивание нашего шедевра – это позволит сделать его ярче и красивее. Орудием труда становятся цветные карандаши или же фломастеры. При желании можете делать раскрашивание красками. Рисуя героинь мультсериала первым делом намечайте контуры. Они должны занимать весь лист. Чем крупнее рисунок, тем легче изобразить мелкие детали, а главное, его легче будет раскрашивать.

Смотреть видео как нарисовать Винкс

Post Views: 2 608

Как нарисовать Флору Винкс карандашом поэтапно

По просьбе наших любимых читателей (особенно девушек) мы подготовили урок о том как рисовать Флору из Винкс.

Флора — местный зеленый маг, по совместительству, лесничий и дриада, кем является по зодиаку. В значение имени некоторые разбежности, римляне впихнули в свою мифологию Флору как богиню весны и цветов, но в действительности это просто набор растительности, с чего вполне логически выходит, что волшебница родилась в капусте. Её родную планету показывают только раз, и отдаленно она напоминает оранжерею с тонким намеком на эльфийские технологии. О родителях ничего неизвестно, и, видимо, в этом свою роль сыграла капуста.

Обладает длинными коричневыми волосами и смуглой кожей, как оказывается, это прототип Дженнифер Лопес, только без застрахованных ягодиц. Как любая среднестатистическая фея-волшебница подросткового возраста носит яркую одежду розового цвета. Страдает синдромом нерешительности, а так же весьма часто жалеет врагов, и они успевают уносить ноги и мстить потом. Парня её зовут Гелия, и это не просто падеж химического элемента. Хоть Флора весьма застенчива, у неё есть чёткий пункт дружить ровно со всеми одинаково и в любом удобном случае получить любую помощь. Соседкой же по комнате является Блум, и так, как это самый главный персонаж мультфильма, то Флора получает свою долю внимания в каждой серии.

К тому же:

Девушку можно отнести к группе девушек-ботанов вместе с Музой, и не только потому, что имена у них странные, а потому, что выглядит это куда красивее и милее, чем парень-ботан;

Ботан тут означает не книжный червяк, а в прямом смысле. Ведь все, чем она занимается — уход за различными цветками и растениями;
Однажды вместе со своей подружкой спасла целый лес, объединив силы природы и воды, за что автоматически заслужила красивый заначек от Гринписа, который в целях сокрытия рекламы в мульте не показывается;

А теперь вы можете нарисовать ее:

Как нарисовать Флору Винкс карандашом поэтапно Шаг первый. Нарисуйте маленькую спичечную девушку в некоем танцевальном па. Шаг второй. Обведите вокруг линий контуры и дорисуйте красивые крылья за спиной. Шаг третий. Постарайтесь выровнять все линии и дорисовать одежду. Шаг четвертый. Теперь можно прорисовать лицо, постараться вывести другие элементы, такие, как рисунок на крыльях, различные шнурки и брелки на одежде. Даю список уроков рисования всех персонажей Винкс:

Винкс Белливикс;
Сиреникс Гармоникс;
Стеллу;
Блум;
Рокси;
Музу;
Текну;

TrustNo1

Специально для DayFun

Портрет Винкс — голосование за рисунки на бумаге — Блог Гризельды про Винкс

Principessa ottima(unica),я думаю,что ты меня убьёшь!Потому что я собираюсь отослать Гризельде такую Флору!!!!!!:(:(:(:(

*FloraBella*
Март 23, 2010 в 20:41

А, забыла сказать, я еще за ФантастическаяЛюбимаяОчатовательнаяРанимаяАнгел
голосовала. Отличный рисунок.
_________________
Спасибо Фло.х:)))
А я голосовала за тебя, Стеллочку, Настенку, Энджи, Юльку… дальше не помну… за многих

Я против рисунков на листе в клеточку и за обрезаные рисунки, т.е. от целого человека отрезали лицо с шеей и на тебе портрет…
Лейла Беливикс, я бы и за твой проголосовал если бы не такая треугольная голова…

Я натуральная Лейла!Без красителей и консервантов!!!:)
Март 24, 2010 в 8:13
Principessa ottima(unica),я думаю,что ты меня убьёшь!Потому что я собираюсь отослать Гризельде такую Флору!!!!!!:(:(:(:(

Собираюсь или собиралась??

Бубу-Смаил-Джимми
Март 24, 2010 в 8:54
Я против рисунков на листе в клеточку и за обрезаные рисунки, т.е. от целого человека отрезали лицо с шеей и на тебе портрет…
Лейла Беливикс, я бы и за твой проголосовал если бы не такая треугольная голова…

Вот сначала сам бы попробовал, а уже потом критиковал!!

252. Стеллочка (автор: Principessa ottima(unica)
(55%, 92 по голосам)

*танцую народный айзербайджанский танец* Я лидирую, я лидирую!!!

нормальные рисунки особенно где айси

Прикольные картинки

Супер!!!я голасуу за всех!!!!!!!!!!!!!!

252. Стеллочка (автор: Principessa ottima(unica)(56%, 101 по голосам)
Я щас на радостях повешусь!!!!!

39 место.нормально.=(

Блин..Почему у меня не получается голосовать..((( Наверно интернет глючит.=(

BambinaAisha,лучше всех!Principessa ottima(unica) твоя переводная серая фигня ничто по сравнению с рисунками BambinaAisha!

Все рисунки очень красивые.

Лизуня-Техна
Март 24, 2010 в 15:23
BambinaAisha,лучше всех!Principessa ottima(unica) твоя переводная серая фигня ничто по сравнению с рисунками BambinaAisha!

ПЕРЕВОДНАЯ?????????????????????? СКАЖИ СПАСИБО СОЗДАТЕЛЯМ ИНЕТА ЗА ТО ЧТО ЧЕРЕЗ НЕГО НЕЛЬЗЯ ПЕРЕДАТЬ УДАР ПО ТВОЕЙ СМАЗЛИВОЙ РОЖЕ!!!!!!!

И вообще. Раз твоя BambinaAisha лучше рисует чем я, то почему мой рисунок на первом месте, а не её?

Прин да не злись ты так!Это поди и есть эта BambinaAisha.

Эндж, твои рисунки УЛЕТ не обращай внимания!

Рисунок 193 РулеZZZZZZZZZZZZZZZZZZZz

Конечно спасибо, но кажись моему раслобону пришёл капец! Эта страшненькая Флора, что стоит после меня, меня догоняет.

А рисунки на компе принимаются???

Я проиграю…Как всегда… *Плачу*

Principessa ottima(unica)
Март 24, 2010 в 17:43
Конечно спасибо, но кажись моему раслобону пришёл капец! Эта страшненькая Флора, что стоит после меня, меня догоняет.
Флора не такая уж и страшная! Она очень красивая и яркая! Мне нравится этот рисунок!и вообще, зачем так волноваться из-за конкурса?Это всего лишь конкурс, а главное не победа, а участие.

Эх…..спасибо большое, Anny! Первый человек, который сказал что-то хорошее про мой рисунок. и что-то умное про этот конкурс.

да! в пррошлом конкурсе 5 место а теперь!!!!!!!!!!!!!! блин. надеюсь хоть гризельда одобрет их и вазмет в приз. а то я всёгда НУДАЧНИТЬСА! но вить главное не победа! а УЧАСТВИЕ!!!!!!!!!!!!!

А я старонница другого мнения! Пришёл, увидел, победил!!

А я сторонница другого мнения : Отправил, не победил, плевать!

Я тож сторонница мнения Фло…
32 место..мдаа…

Блин… BambinaAisha вырвалась вперед меня:(((

некоторые мухлюют!

оля
Март 25, 2010 в 12:56

некоторые мухлюют!
__________
Что ты имеешь в виду?

Principessa ottima(unica)
Март 24, 2010 в 9:10
Бубу-Смаил-Джимми
Март 24, 2010 в 8:54
Я против рисунков на листе в клеточку и за обрезаные рисунки, т.е. от целого человека отрезали лицо с шеей и на тебе портрет…
Лейла Беливикс, я бы и за твой проголосовал если бы не такая треугольная голова…

Вот сначала сам бы попробовал, а уже потом критиковал!!
===============================================
Я не говорю, что я гений или ещё что-то… Но через лист в клеточку достаточно удобно срисовывать! Да, и сами клеточки-тебе помошники… Я пробывал… И у меня всё хорошо получается! Я по-твоему не могу высказать своё мнение? Кстати, если я не могу что-либо сделать, то и в конкурсы я не лезу 😉

Мисс Гризальда, предлагаю следующий конкурс сделать с возрасным ограничением. Я имею ввиду по группам.(от 7 до 10лет; от 11 до 13 лет и т. д.)

Бубу-Смаил-Джимми
Март 25, 2010 в 14:16
Principessa ottima(unica)
Март 24, 2010 в 9:10
Бубу-Смаил-Джимми
Март 24, 2010 в 8:54
Я против рисунков на листе в клеточку и за обрезаные рисунки, т.е. от целого человека отрезали лицо с шеей и на тебе портрет…
Лейла Беливикс, я бы и за твой проголосовал если бы не такая треугольная голова…

Я к твоему сведению, не занимаюсь срисовыванием! А рисовать на клеточках и правда очень удобно.

→ФантастическаяЛюбимаяОчатовательнаяРанимаяАнгел
Март 25, 2010 в 18:36
Мисс Гризальда, предлагаю следующий конкурс сделать с возрасным ограничением. Я имею ввиду по группам.(от 7 до 10лет; от 11 до 13 лет и т. д.)
→Кстати, хорошоя идея! Мне нравится ☺ .

Вместе с рисунком присылать фото свидетельства о рождении? 🙂

По рисункам сразу видно сколько лет автору.Я думаю, отобрать по категориям будет не так уж сложно.

Anny, и еще отдельно конкурс для тех, кто ходит в художественную школу…
Кстати, загляни в компьютерные рисунки. АмуркО — как раз вошла бы в самую младшую группу.

гризельда я хожу в художку по рисунку сколько мне лет?

я почти за все проголосовала…

Гризельда
Март 25, 2010 в 21:03

Вместе с рисунком присылать фото свидетельства о рождении? 🙂
_____________
Вовсе не обязательно 🙂

ФантастическаяЛюбимаяОчатовательнаяРанимаяАнгел
Март 25, 2010 в 18:36

Мисс Гризальда, предлагаю следующий конкурс сделать с возрасным ограничением. Я имею ввиду по группам.(от 7 до 10лет; от 11 до 13 лет и т. д.)
_____________
интересная мысль

Мисс Гризальда, предлагаю следующий конкурс сделать с возрасным ограничением. Я имею ввиду по группам.(от 7 до 10лет; от 11 до 13 лет и т. д.)
__________________
неее.. здесь в основном и есть 10-13 лет.
и вообще, кто как рисует, так и рисует. на мой взгляд, совсем не обязательно делать эти возрастные категории.

Винкс Супер, не знаю. Я не умею определять возраст по рисункам.

прикольно нарисовали!!!

Ваще класс все рисунки такие прикольненькие, особенно те которые рисовала BambinaAisha!Ну вообще все молодцы мне так рисуночки понравились,прям слов нет!Но особенно под номерами:226,227,235,55,66,168,252,258,58,170,282,200,65,284,280,ну короче очень долго все перечислять!Мне понравились все рисунки,но я заметила что некоторые люди просто взяли перевели рисунки и раскрасили!Так что кто честный тот и молодец!

Нютка , спасибо большое! ☺

→Винкс Супер
Март 26, 2010 в 4:37
Гризельда, я хожу в художку по рисунку сколько мне лет?
→Я отвечу. Я конечно в этом тоже не спец, но мне кажется, что примерно 11-12. Я угадала?

а нет 9!

гризельда можно моя сестра в следущем конкурсе поучаствует ей 15

Comments are closed.

Винкс ( Winx ) — Раскраски и прописи для девочек и мальчиков l Загадки l Стенгазеты, детские песни и стихи к праздникам l Сказки l Анекдоты и истории l

Коллекция авторских раскрасок для детей всех возрастов. На данный момент насчитывает 14.365 картинок.
-Азбуки (Русская, Украинская, English)
-Для малышей
-Зарубежные мультфильмы
-Отечественные мультфильмы
-Мандалы

Флеш-раскраски для ваших малышей. Огромный выбор интересных картинок.

Интересные и необычные факты обо всем на свете.

Новый раздел ТРАФАРЕТЫ поможет в оформлении праздников. К новому году добавлены тафареты Ёлочки, Игрушки, Олени, Снеговички, Снежинки. Раздел регулярно пополняется, Следите за новинками.

Игры различных жанров для девочек и мальчиков всех возрастов.

Большая коллекция картинок для развития детей. Ребусы, азбуки, цифры, животные, растения.

Фотографии интересных мест, детей, животных. Все самое интересное в фотографиях.

Стенгазеты ко всевозможным праздникам создадут необходимую атмосферу.
-Стенгазеты «С днем рождения»
-Стенгазеты «С новым годом»
-Стенгазеты «Времена года»
-Стенгазеты «С юбилеем»
-Стенгазеты «C 8 марта»
и много других.

Самые разнообразные лабиринты различной степени сложности.

Интересное и смешное видео с участием детей и животных. Мастер классы.

Детские песни для детей к Новому году и другим праздникам.

Аудио-сказки для детей.

Открытки к праздникам. С Новым годом, 14 февраля — День влюбленных, День Святого Валентина, Деньзащитника отечества-23 февраля, 8 марта, День Победы, 1 мая, Ретро открытки, советские открытки, авторские.

Огромная коллекция смайликов, на данный момент содержит 7371 смайликов.

Всевозможные анимированнные картинки и аватарки для соцсетей.

Детские анекдоты на различные темы: Из жизни животных, Объявления, Отцы и дети, Про Вовочку, Про рыбалку, Школа. Коллекция анекдотов регулярно пополняется, следите за обновлениями.

Веселые истории из жизни с детьми и о них.

Загадки для детей на разные темы

Статьи для родителей о воспитании детей, здоровье детей и их досуге.

Поделки с детьми и для детей. Поделки из бумаги, природных материалов, соленое тесто, лепка из глины и пластилина.

Узнай стоимость своей работы

Бесплатная оценка заказа!

Личный дневник и рисунки по клеточкам

Всем привет. У всех из нас есть хобби, я например собираю блокнотики. Недавно захотел завести себе свой личный дневник, просить купить маму, мне его, не хочу. Я хочу чтобы об этом дневнике знала только я. Поэтому я задумалась о создании дневника собственными руками из того, что у меня есть. В том числе и мои любимые блокнотики, которые я пустила на дневник отрывая от сердца. В интернете много способов украсить обложку, при помощи тех же скотча и бумаги, можно нарисовать что угодно, но я рисую просто ужасно. Пришлось искать альтернативу, так обнаружился отличный способ украсить что угодно, тетрадь, личный дневник и даже школьный дневник — рисование по клеточкам. В интернете просто огромнейшее количество всевозможных схем, как нарисовать любимых героев из мультиков, я находила и Фина из Времени Приключений и Кроша из Смешариков и даже Флору с Блум из Винкс.

Немного предыстории о моих поисках. Рисовать меня учила сестра, пыталась учить точнее, показывала как срисовывать, множество простых способов. Несмотря на все, нарисовать действительно что-то красивое и интересное у меня не выходило, даже обидно немного. Когда я загорелась желанием сделать себе дневник, это кстати в начале лета, так как я перехожу в 4 класс и чувствую себя достаточно взрослой для этого. Моя одноклассница любит украшать все подряд собственными руками, потому совета я попросила у нее, тогда она показала мне листочек в клеточку с нарисованной на ней свинкой из Гравити Фолз. Рисунок был сделан по клеточкам. Я моментально загорелась. Перерисовала к себе в тетрадь схему и побежала домой, там попросила маму поискать мне еще подобных рисунков. Весь вечер мы провели за монитором ноутбука, маме тоже очень понравились рисунки, так что большую часть она сохранила лично для себя. По словам из форумов, такое занятие отлично развивает творческое мышление, моторику рук и пальцев, благодаря чему почерк станет еще красивее. К тому же это отличное занятие, чтобы скоротать время или когда просто нечем заняться.

Отыскав множество схем, я приступила к оформлению заветного дневника. И тут я обнаружила, что не все схемы такие простые, большое количество клеточек, обилие цветов, все это не слабо поставило меня в тупик. Мой дневник не был рассчитан на подобное. Пришлось доклеивать несколько листов, на один, чтобы получился рисунок. Украшать дневник было очень весело иногда кажеться, даже веселее чем его вести.

Вообще рисую по клеточкам я уже несколько месяцев. Сперва банально срисовывала с готовых разбивок, постепенно усложняя рисунки или дополняя их своими деталями, мне очень понравился данный стиль, он кажется легким, но в нем есть множество интересных веще и задач, которые нужно решить, если вы решите самим создать схему. Я пробую делать это на примере простых мультяшных персонажей, получается не всегда, но я только учусь.

Не имея таланта, вы сможете поразить любого своими художественными талантами, при помощи цветных карандашей и листочка в клеточку. Причем не всегда нужен цветной карандаш, есть множество черно-белых рисунков по клеточкам, они довольно сложные, но в тоже время завораживают взгляд. Найти схемы можно где угодно, раньше мама рассказывала, что не было интернета и все приходилось искать в ручную по журналам. Сейчас вводите в одну из поисковых систем, запрос «рисунок по клеточкам» и вы сможете найти все кучу интересных и забавных рисунков, а самое главное, здесь не нужен огромный талант. Все наоборот, начиная рисовать по клеточкам, можно выработать свой собственный стиль, которому позавидует кто угодно. Кстати можно рисовать не только на бумаге, если постараться, можно перенести рисунок такого плана и на футболку, правда если вам разрешат. Вам понадобиться линейка, ватман, карандаш и сама футболка, выбираете сколько нужно клеточек и какого размера, расчерчиваете на ватмане или картонке, вставляете под футболку, желательно светлую и рисуете красками по клеточкам, которые просвечиваются.

Яндекс Дзен | Открывайте новое каждый день

Яндекс.Дзен – это платформа, которая подбирает контент специально для вас. В Дзене есть статьи и видео на разные темы от блогеров и медиа.

Ваш личный Дзен

Дзен понимает ваши интересы и собирает ленту для вас. Он анализирует действия: что вы смотрите, кому ставите лайки, на кого подписываетесь, а после – рекомендует вам и уже любимые источники, и ещё неизвестные, но интересные публикации.

Вы смотрите и ставите лайки

шаг 1

Алгоритм отслеживает это и подбирает контент

шаг 2

Вы видите интересные именно вам материалы

шаг 3

Интересные истории

В Дзене есть популярные медиа и талантливые блогеры. Ежедневно они создают тысячи историй на сотни разных тем. И каждый находит в Дзене что-нибудь для себя.

Примеры публикаций

В Дзене действительно много уникальных статей и видео. Вот несколько примеров популярного сейчас контента.

Дзен — простой, современный и удобный

Посмотрите на главные возможности сервиса и начните пользоваться всеми преимуществами Дзена.

Читайте о своих интересах.

Алгоритмы Дзена понимают, что вам нравится, и стараются показывать только то, что будет действительно интересно. Если источник вам не подходит — его можно исключить.

1/4

Тематические ленты.

С общей ленты со всеми статьями легко переключайтесь на тематические: кино, еда, политика, знаменитости.

2/4

Разнообразные форматы.

Открывайте разные форматы историй для чтения и общения. В приложении удобно читать статьи и смотреть видео, писать комментарии.

3/4

Оставайтесь в курсе событий!

Возвращайтесь к нужным статьям: добавляйте статьи в Сохранённое, чтобы прочитать их позже или сохранить в коллекции. Настройте уведомления, чтобы не пропустить самое интересное от любимых блогеров, медиа и каналов.

4/4

Читайте о своих интересах.

1/4

Тематические ленты.

С общей ленты со всеми статьями легко переключайтесь на тематические: кино, еда, политика, знаменитости.

2/4

Разнообразные форматы.

3/4

Оставайтесь в курсе событий!

4/4

Читайте о своих интересах.

1/4

Тематические ленты.

С общей ленты со всеми статьями легко переключайтесь на тематические: кино, еда, политика, знаменитости.

2/4

Разнообразные форматы.

3/4

Оставайтесь в курсе событий!

4/4

Дзен доступен во всем мире более чем на 50 языках

Смело рекомендуйте Дзен своим друзьям из других стран.

العَرَبِيَّة‎العَرَبِيَّة‎

Удобно пользоваться в смартфоне

У Дзена есть приложения для iOS и Android.

Пользуйтесь в браузере

Дзен доступен с любого устройства в вашем любимом браузере. Также Дзен встроен в Яндекс.Браузер.

Удобно пользоваться в смартфоне

У Дзена есть приложения для iOS и Android.

Пользуйтесь в браузере

Дзен доступен с любого устройства в вашем любимом браузере. Также Дзен встроен в Яндекс.Браузер.

Удобно пользоваться в смартфоне

У Дзена есть приложения для iOS и Android.

Пользуйтесь в браузере

Дзен доступен с любого устройства в вашем любимом браузере. Также Дзен встроен в Яндекс.Браузер.

Дизайн и разработка — Charmer

К сожалению, браузер, которым вы пользуйтесь, устарел и не позволяет корректно отображать сайт. Пожалуйста, установите любой из современных браузеров, например:

Яндекс.Браузер Google Chrome Firefox Safari

Как нарисовать винкс беливикс карандашом. Как нарисовать блум из винкс карандашом поэтапно Как нарисовать винкс блум карандашом

Наверное, каждая девочка смотрела мультфильм «Клуб Винкс: Школа волшебниц», рассказывающий о необычных приключениях девушек-фей. Красавицам приходится постоянно спасать мир от нападения темных сил, а также решать собственные проблемы, ведь у каждой из них, как и у любой девушки, есть личная жизнь и свое место в мире.

Главной героиней сериала является Блум, которая неожиданно узнала о мире фей и о том, что она сама — одна из них. Попав в Алфею, школу для фей, Блум вместе со своими однокурсницами основала Клуб Винкс. Решительная, сильная, энергичная, но немного упрямая Блум стала любимицей многих девушек. Не могли обойти эту интересную личность и мы. Давайте узнаем, как нарисовать фею Блум !

Как нарисовать лицо Блум шаг за шагом

1. Прежде всего, на чистой бумаге изображаем овал головы и обозначаем две вспомогательные линии: центральную линию лица и линию глаз, а также опорные линии и точки тела.

Важно знать! На начальных этапах не дави сильно на карандаш, чтобы потом было легче вытереть вспомогательные линии.
Овал головы должен быть похожим на перевернутое яйцо, ведь обычно в лице человека подбородок сужен, а лоб расширен.
Центральная линия смещена в левую сторону, поскольку голова Блум повернута в левую сторону.
Опорные линии тела помогают нам лучше понять и правильно изобразить положение рук и туловища феи на рисунке.

2. На этом этапе прорисовываем характерное для Блум лицо: пухлые щечки и острый маленький подбородок. Легкими движениями намечаем прическу феи, но пока без деталей.

Также на этом этапе на основе опорных линий схематично рисуем тело и руки Блум.

3. Перед тем, как начать рисовать черты лица, слегка наметь их положение.

На этом этапе особое внимание удели глазам. Они красивые, большие и выразительные. А еще взгляд Блум украшают длинные черные ресницы.

Подсказка: Глаза феи по форме похожи на семена подсолнечника.

4. Если глаза уже нарисованы, можно смело рисовать носик и губы Блум. Заметь, как она мило улыбается!

Теперь уже можно без колебаний стереть все вспомогательные линии.

5. На этом этапе в деталях нарисуй прическу. Когда прическа будет готова, можно перейти к одежде феи, а именно к полосатому гольфику и джинсовой юбке.

Также на этом этапе детально нарисуй хрупкие пальчики Блум.

6. Поздравляю! Портрет готов! Осталось только ярко раскрасить его цветными карандашами или красками.

Как рисовать Винкс Блум в полный рост шаг за шагом

1. Сначала наметим овал головы, опорные точки и линии тела феи. Получится что-то вроде скелета или спичечного человечка.

Важно знать! На этом этапе тщательно проследи за положением рук и ног Блум. Правильно нарисованные опорные линии в будущем смогут помочь Тебе изобразить все тело.

2. Построим тело феи с помощью различных геометрических фигур. Сейчас она немного похожа на деревянную куклу, не так ли?

Этот способ мы уже практиковали, когда . Надеюсь, мои рекомендации помогли Тебе в творчестве! Применим этот метод и в рисунке феи Блум.

Подсказка. Можно делать геометрические фигуры любых форм, главное, чтобы они схематично изображали тело феи.

3. Итак, мы получили конструкцию тела Блум. С ее помощью сможем легко нарисовать все тело феи. Для этого сначала нарисуем ее лицо и слегка наметим волос.

Затем плавными линиями изображаем туловище и руки. А теперь приступаем к рисованию ног.

Важно знать! На этом этапе тело рисуем без деталей, не вырисовывая пальцы и одежду.

4. Когда силуэт феи готов, переходим к деталям. Начнем с головы: нарисуй глаза, носик и губы феи. Затем приступай к прическе.

Волосы Блум длинные и подкрученные на кончиках.

Также на этом этапе можно вытирать все вспомогательные линии, они нам больше не понадобятся.

5. После этого нарисуй пальчики на руках, одежду (а именно голубой топ, юбку и длинные перчатки — ничего не забудь), обувь феи и ее маленькую корону, а также тщательно прорисуй крылья. Ведь какая же тогда она фея, если без красивых крыльев?

6. Поздравляю! Рисунок Блум готов!

По желанию, раскрась фею цветными карандашами или красками!

Также Ты можешь добавить к рисунку феи необычный фон, или другие детали.

Успехов в творчестве!

Здесь вы узнаете, как нарисовать симпотяшку фею Блум поэтапно карандашом из мф»Клуб Винкс: Школа волшебниц».

Шаг 1. Рисуем основу головы Блум в виде круга, и двумя линиями указываем направление лица. Голова у нее повернута слегка в сторону. Рисуем подбородок, который ниже основы головы, щеку, впадину для глаза и лоб.

Шаг 2. Рисуем маленький носик Блум и губы. Губы я специально увеличила, чтоб было видно как их рисовать, с одной стороны шире, с другой уже — смотрите на картинку. Потом рисуем основу глаз и брови.

Шаг 3. Рисуем глаза Блум. Рисуем контур радужной оболочки глаз и зрачки с бликами. Обратите внимание, что в одном глазе оболочка и зрачок имеет форму круга, а в другой глазе — неправильную форму. Затем рисуем ресницы.

Шаг 4. Рисуем прическу у Блум. Потом рисуем маленькое ухо. Нажимает на рисунок. После этого стираем все ненужные линии на лице.

Шаг 5. Рисуем тело Блум. Сначала рисуем длинную шею, затем мысленно или очень тонкими линиями проводим вспомогательные линии. И смотрите, расстояние от шеи до талии должно равняться длине головы. Так как ее корпус повернут в сторону, прорисовываем прогнутую спину и выпирающую часть груди. Потом прорисовываем все остальное.

Шаг 6. Рисуем одежду на теле Блум.

Шаг 7. Дорисовываем волосы и косички. Потом приступаем к рисованию крыльев.

Шаг 8. Дополнительно на крыльях, если хочется, прорисовываем извилистые линии, и в волосах, которые за телом, прорисовываем пряди. Все, наша красавица готова.

Флора — фея, родившаяся на планете Линфея, магия которой напрямую связана с природой. До вступления в клуб она была очень застенчивой.
Стелла прилетела с планеты Солярия. Она жизнерадостна, искренна, весела и щедра. Благодаря серьезному вниманию к своей внешности она неоднократно побеждала на конкурсах красоты. Она любит шопинг, и ее гардероб считается самым большим во вселенной!
Муза — волшебница с планеты Мелодия. Она родилась в семье профессионального пианиста и великой вокалистки, однако мама вскоре скончалась, а отец решил бросить музыку и запретил одаренной дочери развивать свои способности.
Текна — девушка с планеты Зенит, на которой все фантастические вещи и явления напрямую связаны с развитием технологий. С младенческого возраста Текна не расстается с карманным компьютером. Логичная и рациональная, она гениально составляет планы действия. С близкими она очень ласкова и открыта.
Лейла — фея с водной планеты Андрос. Ее родители постоянно находились в командировках, поэтому девочка оставалась одна и коротала время за освоением правил этикета.
Блум — именно она стала основательницей клуба. Ее магические способности проявились в 16 лет, когда она пыталась спасти Стеллу.

Каждую из этих героинь можно не просто нарисовать карандашом, но и оживить разноцветными красками!

Чего еще мы не знали о феях Винкс?

Почему именно такое название дано школе «Алфея». Секрет кроется в сакральном смысле буквы «Альфа» — «начало начал».

Интересно, что прообразом внешности основательницы клуба отчасти стала Бритни Спирс, а характер был списан с супруги режиссера — Джоан Ли.

На мультсериал огромное влияние оказали сериал «Сейлор Мун» и книжная серия «Гарри Поттер». А внешность большинства героинь родилась под впечатлением от кукол Барби.

Как нарисовать Фей Винкс даже тем, кто никогда раньше не рисовал, мы предельно доступно изложили в виде простых последовательных шагов в этом разделе.

Рисуем любимых фей Винкс самостоятельно.

Маленькие фанатки мультфильмов очень любят изображать своих героев на рисунках.
Но, к сожалению, не у всех это получается.
Несложные приемы рисования, приведенные в этой статье, помогут начинающим художницам наслаждаться эскизами любимых героев Винкс, созданных своими руками.

Как нарисовать Винкс поэтапно карандашом для начинающих?

Персонажи Винкс

Очень яркий и сложный наряд, специфическая фигура создают определенные сложности при изображении Винкс.
Конечно цветное изображение лучше передает характер героинь, но легче всего делать первые попытки с набросков карандашом.

Особенности изображения деталей при рисовании волшебниц:

Лицо. Лоб широкий, закрыт челкой. Глаза большие, сдвинуты к центру. Нос в виде маленького треугольника. Губы небольшие, пухлые.
Руки. Запястье узкое. Длина руки равна сумме длины двух голов. Локти делят руку точно пополам.
Грудь. Грудная клетка чуть шире лица. Форма чашечек-слегка заостренная.
Талия — меньше груди в 2 раза.
Бедра переходят от талии резко, под углом резкий и угловатый.
Ноги. Бедра и икры одинаковы по ширине. Коленный сустав находится посередине. Стопа ближе к пальцам заужена.

Начинаем с эскиза фигуры феи.

Для обозначения контуров фигуры делим лист бумаги на семь параллельных линий.
Чертим круг для головы — в нижней части верхнего квадрата.
Для плечей и рук отводим верхний отсек второй части.
Бедра — начало центра третьего сегмента
Колени — верхняя часть пятой части получившегося квадрата.
Намечаем штрихами направление оставшихся элементов туловища. Начинаем с головы опускаясь вниз. Последними рисуем ноги и руки.
Четко обрисовываем все обозначенные контуры ранее прочерченных линий.
Не забываем наметить изящную талию.
Ноги изображаем немного согнутыми.
Плечи высоко приподнимаем.
Делаем четкий контур рук и ног.

Герои Винкс карандашом

Рисуем волосы и хвостики. Намечаем глаза, нос, рот. Прорисовываем все элементы.

Если трудно нарисовать Винкс сразу в одежде, сначала тренируемся в наброске фигуры. «Одеть» героиню можно позже.
Также со временем «набив» руку можно перейти и к крыльям.

Стираем все вспомогательные линии
Когда наброски карандашом сделаны, приступаем к раскрашиванию.

Важно подчеркнуть волшебную силу героини:

Голубые и бирюзовые оттенки для волшебниц водяной стихии
Красные и апельсиновые — для огненных фей
Ведьм Трикс делаем бордовыми, фиолетовыми и черными карандашами.

Как нарисовать Блум из Винкс?

Самой большой любовью и популярностью, среди поклонниц мультфильмов о Винкс, пользуется симпатичная фея Блум.
Особенно яркий наряд выделяет ее среди остальных героинь сказочной истории.
Изображают ее различными способами.

Вот один из них:

Рисуем основу головы Блум в виде круга
В внутри него, двумя линиями указываем направление лица
Голова у феи повернута, слегка, в сторону
Определяем подбородок, который ниже основы головы, щеки, впадины для глаз и лоб

один зрачок круглый
другой — неправильной формы

Подрисовываем ресницы.

Начинаем с очертания тонкой линии шеи.
Рисуем тело так, чтобы длина от шеи до талии была равна длине головы.
Чтобы повернуть немного корпус персонажа, рисуем прогнутую спину и выпирающую часть груди.
Рисуем остальные части тела.

При желании делаем любой красивый рисунок на крыльях.

Любуемся готовым персонажем.

Видео: Как нарисовать фею Винкс?

Как нарисовать Флору из Винкс?

Кокетливую героиню начинаем рисовать с головы
Рисуем круг в верхней части центра листка
Внутри шара намечаем нос и глаза, снаружи — волосы, подбородок и губы

Более крупно лицо можно срисовать с этой картинки.

Видео: Как нарисовать Винкс Флору?

Как нарисовать Музу из Винкс?

Творим Музу на бумаге карандашом

Синеглазую, экзотическую с эффектными волосами фею можно очень быстро нарисовать, с помощью подсказок.

Оформляем контуры вспомогательного каркаса

Из лицевой части сделанной основы формируем подбородок, щеки, ухо.
Рисуем:

красивые глаза
тонкие брови носик
пухлые губки
На голове добавляем пушистые хвостики.

Немного сложнее рисовать туловище.
В первую очередь надеваем на фею топ.
Очерчиваем силуэт талии.
Добавляем короткие шорты.

При желании можно раскрасить фею в яркие цвета.

Как нарисовать Стеллу из Винкс?

Стела на бумаге, карандашом

Достаточно легко изобразить небольшой портрет эксцентричного персонажа мультфильма.

Необходимо подобрать несколько карандашей разной твердости.
Форму головы, линии носа и глаз намечаем карандашом средней твердости.

Контуры лица, рот и нос прочерчиваем тем же карандашом. Для глаз используем очень мягкий грифель.

Линии одежды и волос намечаем не слишком твердым карандашом.

Оттеняем светлую часть глаз твердым грифелем, темную — мягким. Открываем глазки, добавляя зрачок.
Нос определяем мягким маркером.

Слегка тонируем шею и лицо средней твердости карандашом.

Прическу штрихуем немного мягким грифелем.
Контур волос оформляем жирно.

Одежду штрихуем средней мягкости карандашом, контуры выделяем – жирным.
Наша Стелла готова.

Видео: Как нарисовать Винкс Стеллу?

Как нарисовать Винкс Сиреникс?

Фею Синерикс немного проще рисовать, чем предыдущих героинь.
Для тех, кто обладает навыками рисования можно попробовать более сложный вариант создания рисунка.
Для создания контуров частей тела чертим окружности.

Рисуем руки и ножки. Делаем наброски волос и глаз.
Четко прорисовываем все детали наряда.

Добавляем красивые, большие крылья как у бабочки.
Лицу и прическе уделяем особое внимание. Рисуем очень аккуратно и тщательно.

Завершаем тонировкой отдельных частей рисунка для более эффектного образа.

Рисуем лицо для фей.

Как нарисовать Винкс Манекены?

Для тех, кто только начинает рисовать, самый простой вариант — манекены.
Его можно изготовить несколькими способами:

Обвести со скрина из мультфильма с помощью фотошопа
Перевести через копирку контуры, имеющегося изображения
Наложить портрет на стекло и скопировать очертания фигуры на чистый лист

Любой из способов дает возможность получить основу для дальнейшего творчества.
Имея в запасе несколько манекенов, можно рисовать разные прически и гардероб любимым героиням.

Нарисовать фею Винск очень сложно, даже по клеточкам.
Яркая одежда и прическа имеют огромное разнообразие цветов, поэтому практически каждая клеточка имеет разный цвет.
Тем не менее,

Это очень полезное и интересное занятие для детей любого возраста.
Рисунок получается очень красивым и правдоподобным.
У ребенка развивается усидчивость, внимательность и ответственность.

Ведь чтобы не ошибиться, нужно очень тщательно считать клеточки.
Приступая к рисунку, необходимо очень внимательно перенести предлагаемые шаблоны на бумагу.
Для этого:

Распечатываем предложенные ниже варианты на чистом листке.
Берем любого формата листок в клеточку.
Начинаем отсчитывать клеточки от верхнего края листка, до выбранной клеточки рисунка.
Слегка намечаем на левой стороне клетчатого листка это расстояние.
Считаем на шаблоне рисунка количество клеток от левого края до той-же выбранной клетки.
На листке в клетку производим отчет полученного числа клеток по левому краю, от намеченной точки по высоте
Первую клетку нашли — фиксируем ее не слишком жирной точкой.
Продолжаем намечать следующую клеточку рисунка подобным образом.
Сделав полностью набросок рисунка, раскрашиваем его.
Вот несколько интересных рисунков для творчества.

Рисуем по клеточкам героинь Винкс

Нарисовать любой мультгерой очень сложно.
Персонажи Винкс также сложны в исполнение.
Но творить своими руками любимую героиню очень интересный и увлекательный процесс.
Немного терпения, и с каждым новым уроком, результат преложенных усилий, все больше и больше будет радовать глаз маленькой художницы.

Видео: Уроки рисования. Как нарисовать Блум из мультика Винкс?

Для многих детей Винкс стали своеобразными друзьями. Число желающих изобразить на бумаге прелестных девочек растет с каждым днем. Поэтому неудивительно, что многие поклонники мультфильма задаются вопросом: «Как нарисовать Винкс?».

Детали

Из-за достаточно яркого, контрастного и сложного наряда рисовать их не совсем легко. Но плюсом является их фигура — специфическая особенность Винкс. Они имеют тоненькую талию и длинные ровные ножки. Эти характерные детали необходимо принять во внимание, чтобы определиться, как нарисовать Винкс карандашом. Хотя за счет своей яркой одежды девушки лучше выглядят в цветном изображении. Так они больше похожи на оригинал.

Творческий процесс

Пора приступить к непосредственному процессу рисования. Первым делом необходимо сделать эскиз фигуры Винкс. Этот этап начинается с обозначения основных контуров тела персонажа. Для этого мы делим лист бумаги на 12 квадратов. Затем выделяем окружностями голову. Она будет в нижней части верхнего квадрата. Рисуем овал. Плечи — верхняя часть второго отдела. Бедра — нижний отсек второго квадрата. Рисуем круг. Колени — середина третьего сверху квадрата. Остальные части тела обозначаем штрихами, отметив лишь их направление.

Следующим этап будет обрисовка ранее прочерченных линий. Таким образом, необходимо обозначить контуры тела Винкс, чтобы получилась заготовка. Нельзя забывать об изящной и утонченной талии персонажа. Ноги рисуем слегка согнутыми в коленях. Уровень плеч должен быть высоко поднятым. Обводим очертания рук и тоже самое делаем с ногами. Помните, что персонажи Винкс всегда носят обувь на высоких каблуках. Какими бы фантастически красивыми не были девушки, рисовать их нужно похожими на людей. Пришло время стереть все дополнительные линии, контуры и вспомогательную сетку.

Переходим к уточнению деталей изображения. Они важны. Детально прорисуем руки и ноги девочки. Не забываем о пропорциях и правильной форме всех частей тела. Главными отличительными от людей чертами считаются крылья и удивительная длина ног. Можно сказать, что рисунок готов на 80 процентов.

Пришло время уделить внимание декоративным элементам костюма Винкс. Выделяется линия застежки на платье, помечаются пуговицы. Можно дорисовать бантики или перчатки. И перейдем к самому милому этапу урока: «Как нарисовать Винкс?», а именно к обрисовке ее лица. Глаза у девочки довольно большие и выразительные, маленький носик и аккуратный рот. Волосы Винкс можно назвать ее украшением. Они довольно часто очень длинные, поэтому нарисовать их не составит большого труда. Изображаем вьющиеся локоны и завитушки. Рисуем крылья Винкс. Можно пофантазировать: они напоминают крылышки огромной красивой бабочки. Когда их очертания готовы, нужно поделить их на сегменты и выделить прожилки. Крылья Винкс — полупрозрачные и легкие. Вот и получилось изображение любимого персонажа.

Цветной рисунок

Изображение Винкс в черно-белом цвете, конечно, очень красиво, но не передает всей яркости и оригинальности персонажа. Поэтому лучше раскрасить картинку с помощью цветных карандашей или фломастеров. Можно нарисовать большую картинку. Тогда не будет мелких деталей, раскрашивать будет легче. Работа готова. Как нарисовать Винкс Сиреникс? Последовательно выполняя все шаги, сделать это будет нетрудно. В принципе, задача под силу любому начинающему художнику.

Как нарисовать Винкс Блумикс?

Настоящие поклонники мультсериала не смогут остановиться на достигнутом результате. Они захотят усовершенствовать свое мастерство, как и их любимые персонажи. Поэтому неплохо бы нарисовать превращение Блумикс. Это как? Конечно, Сиреникс и Блумикс не очень отличаются внешне. Но разница есть. Одежда и аксессуары у Блумикс ярче и выглядят более стильно. Так что, в принципе, последовательность не очень отличается, только делаем акцент на крыльях. Они в Блумиксе должны быть более изящные и утонченные. Изучите какую-нибудь картинку. Вот на что нужно обратить внимание, чтобы сообразить, как нарисовать Винкс (Блумикс).

Любимый персонаж

Не секрет, что любимой феей множества девчонок является Блум. Почему? Ее возможности и сила практически не превзойдены ни одной другой феей. А ее яркий наряд так и выделяется на фоне остальных персонажей. Наступило время выяснить, как нарисовать Винкс Блум.

Начинаем работу с изображения головы. Рисуем круг и добавляем в нем линии, чтобы наметить части лица. Переходим к разметке плеч и рук. Делаем наброски юбки. Она у всех Винкс довольно короткая, чтобы подчеркнуть уникальную длину ног. Теперь изображаем лицо, дорисовываем волосы. Начинаем с локонов, которые перекинуты через плечо вперед. Дорисовываем остальную часть волос, не забывая о заколке. Уделяем внимание детальному изображению всех черт лица. После этого переключаемся на руки. Будьте аккуратны. Левую руку мы нарисуем на талии, а правая будет поднята на уровне лица в развернутом виде. Ее указательный палец как будто задает направление. Прорисовываем одежду: топик и юбку. Затем передаем ноги персонажа. Блум находится в устойчивой позиции. Ноги рисуем слегка расставленными в стороны. Обувь на высоких каблуках еще больше удлиняет их. Рисунок почти готов. Осталось только раскрасить его, и у вас получится копия настоящей Блум. Теперь вы и сами знаете, как нарисовать Винкс. Помните, что у Блум в наряде и окраске головы должны преобладать рыжие и бирюзовые оттенки.

Постер собственными руками

Ярые почитатели мультсериала всегда хотят иметь постер с изображением любимых персонажей. Но главная проблема — не просто найти его, но и подобрать кадр из фильма, который больше всего понравился. Это не всегда просто. Чтобы решить эту задачу, лучше просто изготовить постер самостоятельно. И осуществить это можно двумя путями.

Первый — взять большой ватман и нарисовать одного персонажа или группу. Другой, более интересный способ, − также взять ватман и наклеить на него несколько собственноручных рисунков любимых моментов из сериала, либо мини-постеры всех сезонов. Получится симпатичный коллаж. Он будет отличаться необычайной оригинальностью. К тому же, вы сможете гордиться тем, что сделали его самостоятельно, что другого такого больше нет. А при желании такое изделие можно подарить товарищу или подруге. Истинные ценители не останутся равнодушными к такому сюрпризу. А вы сможете гордиться собственным мастерством. Кроме того, зная, как нарисовать Винкс, можно оттачивать свое мастерство, изображая других мультяшных героев.

Эбигейл Коуэн о побелении критики

«Судьба: Сага о Винкс», экранизация Netflix итальянского мультсериала «Клуб Винкс», который транслировался на канале Nickelodeon в США, выходит в пятницу. Но как вы уже догадались по трейлеру, это не «Винкс» из вашего детства.

«Мне всегда нравится поговорка« Аудитория Винкс »выросла, и мы тоже», — сказала TheWrap Эбигейл Коуэн, которая играет главную роль в «Судьбе: Сага о Винкс» в роли огненной феи Блум. «Так что это определенно переосмысление итальянского мультфильма.И мы хотим удивить и порадовать тех, кто знаком с существующим шоу, а также четко обозначить себя как живое действие «Судьба» ».

Квасцы «Chilling Adventures of Sabrina» добавили: «Это определенно больше для взрослых».

Также читайте: Трейлер «Судьба: Сага Винкс» приветствует вас в Алфее — это как Хогвартс, но для фей (видео)

Созданный Брайаном Янгом («Дневники вампира»), «Судьба: Сага о Винкс» представляет собой серию из шести эпизодов, в которой рассказывается о пяти феях, посещающих Алфею, волшебную школу-интернат в Потустороннем мире, где они должны научиться овладевать своими силами во время навигации. любовь, соперничество и монстры, которые угрожают самому их существованию.

Если это напоминает вам об очень любимой франшизе о мальчике, который жил — ну да, это сравнение нисколько не потеряно для Коуэна или самого шоу.

«В первом эпизоде есть упоминание о Гарри Поттере, и я думаю, что это забавно и иронично, — сказал Коуэн.

Сходство еще глубже для персонажа Коуэна, Блум, которая всю свою жизнь до сих пор верила, что она человек, только чтобы узнать, что она не просто фея, а довольно могущественная. Похоже на любого знакомого вам подростка-волшебника?

Также читайте: Кирнан Шипка все еще хочет «леденящие кровь приключения Сабрины» — кроссовер «Ривердейл»

«Для Блум очень тяжело, когда она идет в место, где она должна вписаться, и даже там она обнаруживает, что нет, и что есть еще что-то другое», — сказал Коуэн.«И это травматично, с этим действительно трудно справиться. Как и в чьей-либо жизни, когда вы узнаете о себе что-то, чего не знали, путешествие к самопознанию само по себе становится трудным ».

Вместе с Коуэном в «Судьбе: Сага о Винкс» снимаются Ханна ван дер Вестхуйсен в роли световой феи Стеллы, Драгоценный Мустафа в роли водной феи Аиши, Элиот Солт в роли земной феи Терры, Элиша Эпплбаум в роли феи разума Мусы и Сэди Совералл в роли загадочной феи по имени Беатрикс.

Блум, Стелла, Аиша и Муса — все персонажи из мультсериала «Клуб Винкс», а Терра и Беатрикс — недавно созданные для «Судьба: Сага о Винкс.Когда впервые был объявлен кастинг для шоу Netflix, некоторые фанаты мультсериала раскритиковали выбор Терры и Мусы в социальных сетях, назвав кастинг «побелкой», потому что Терра (которая напоминает латиноамериканскую земную фею из «Винкс Клуба» , Флора) и Муса (фея из Восточной Азии в мультфильме) играют актрисы, которые кажутся белыми.

Также читайте: Звезда «Леденящие душу приключения Сабрины» Кирнан Шипка разрушает «Трагический конец» Ника и Сабрины

Хотя Коуэн сказала, что не может «разговаривать с процессом отбора» как звезда сериала и не участвовала в этом аспекте «Судьба: Сага о Винкс», она считает, что «важно, чтобы мы вели эти разговоры.Она также сказала нам, что, если сериал будет продлен на 2 сезон, она считает, что Флору представят.

«Я могу сказать, что Елисей великолепен в роли Мусы. Я не могу дождаться, когда фанаты увидят ее выступление », — сказала она. «А Флоры на самом деле нет в нашем сериале. Я знаю, что в этом есть некоторая путаница — в первом сезоне ее нет. Персонаж Элиота — это Терра, созданная специально для сериала. Не могу дождаться, когда фанаты тоже влюбятся в нее. Она такая веселая, такая милая.Я имею в виду, что она такой милый персонаж. И я думаю, что заблуждение состоит в том, что персонаж Элиота — Флора. Но Терра совсем новая, она переосмыслена ».

Коуэн продолжил: «Если нам посчастливится получить второй сезон, я думаю, Флора будет привлечена, и я определенно приветствую это. Я не участвую в процессе подбора кадров, но я думаю, что если сериал действительно перейдет во второй сезон, я надеюсь, что эти проблемы можно будет решить, потому что я действительно думаю, что разнообразие как перед, так и за камера жизненно важна и востребована во всей отрасли и во всем мире.Поэтому я считаю важным, чтобы мы говорили об этом ».

Человек со знанием дела говорит TheWrap, что если появится 2-й сезон «Судьбы: Сага о Винкс», то на самом деле есть надежда привлечь в сериал Флору, которую создатель сериала Брайан Янг назвал в интервью двоюродной сестрой Терры.

«Судьба: Сага о Винкс» выходит в пятницу на Netflix.

Компьютерная программа для рисования морфологии кристаллов, секторов роста и поперечных сечений с помощью файлов экспорта в VRML V2.0 utf8-формат виртуальной реальности

компьютерные программы

566 doi: 10.1107 / S0021889805012148 J. Appl. Cryst. (2005). 38, 566–567

Journal of

Applied

Кристаллография

ISSN 0021-8898

Получено 27 января 2005 г.

Принято 18 апреля 2005 г.

# 2005 Международный союз кристаллографии

Отпечатано в Великобритании — все права зарезервировано

WinXMorph: компьютерная программа для рисования кристаллов

морфологии, секторов роста и поперечных сечений с

экспортными файлами

в VRML V2.0 utf8-формат виртуальной реальности

Вернер Камински

Химический факультет Вашингтонского университета, Сиэтл, Вашингтон, США. Электронная почта для корреспонденции:

[email protected]

Приложение Microsoft Windows для пользователей ПК, WinXMorph, представлено с

, в котором морфологии кристаллов, близкие к реальности, создаются и экспортируются как файлы виртуальной реальности

в VRML Формат V2.0.

1. Предпосылки

Морфология кристаллов, часто называемая формой или габитусом кристалла,

представляет собой идеализированную комбинацию граней кристалла.Столетие назад было бы немыслимо представить научный результат на кристалле

без демонстрации формы кристалла, которая представляет тип и размер

морфических граней, которые кристалл развил в процессе своего роста. Примеры par

excellence — Volumes by Groth (1921). В этих и других

публикациях того же времени формы кристаллов были построены из стереографической проекции материала

(на немецком языке: Kopfbildpro-

jektion).Этот трудоемкий процесс был заменен компьютером

сгенерированных изображений (Даути, 1980). Сегодня для персональных компьютеров доступны некоторые программные пакеты

, которые позволяют создавать морфологии

, включая затенение лиц относительно их угла

относительно виртуального источника света (Weber, 2005; Dowty, 2005;

). Фавро, 2005). Однако виртуальная реальность, то есть файлы моделей кристаллов, которые кодируются стандартом VRML V2.0 utf8

, поддерживаются только коммерческой программой JCrystal

Штеффена Вебера (2005).Возможность создания

почти реальных изображений кристаллов, идеализированных или

близких к реальному образцу, является одной из особенностей программы

, представленной здесь.

2. Описание

Программа принимает в качестве входных данных индексы Миллера и центральные расстояния.

Их можно свободно редактировать, и ввод автоматически корректируется, например,

(063) уменьшается до (021), или грань может быть включена в набор граней

только один раз.Программа обеспечивает 32-точечные симметрии

и PG 

55

332 икосаэдрической системы и позволяет в качестве входных нецелых чисел

, с помощью которых могут быть реализованы несоизмеримые формы кристаллов.

Однако при желании каждую грань можно редактировать индивидуально в отношении цвета, текстуры

, расстояния по центру, индексов и цвета сектора роста.

Программа экспортирует файлы VRML, которые могут быть вставлены в качестве иллюстраций в Интернет, или растровая копия текущего изображения сохраняется как

*.bmp на жестком диске.

В качестве примера мы видим на рис. 1 изображение, имитирующее K

, что

было выращено в растворе, содержащем краситель трипановый синий, который

окрашивал только {111} грани [обсуждение окрашенных кристаллов см. Kahr

& Gurney (2001)].

На рис. 2 показано поперечное сечение примера на рис. 1, разрез

на одну пятую нормального вектора грани (010).Такие изображения, как

, редактируются в течение нескольких минут и отображаются в реальном времени,

позволяет плавно вращать модели вручную или с помощью анимации.

Особенностью является текстура граней, проиллюстрированная в кристалле пирита

и примерах розового кварца на рис. 3 и 4.

Нецелочисленные индексы использовались для создания модели бриллианта

бриллиантовой огранки на рис. 5. Группирование модели с самой собой с различными смещениями / масштабами / ориентациями

показано на рис.6, представляющий ансамбль

кристаллов кварца, который можно вращать и смотреть с

под любым углом.

Программа позволяет комбинировать файлы VRML структуры

, созданные из файла shelxl.res (Oellien, 2005), тензорного VRML, созданного

с помощью WinTensor (Каминский, 2005), и формы кристалла из

WinXMorph, правильно выровнены друг с другом и повернуты одновременно. На рис.7 показан пример структуры, оптического вращения и морфологии

в манните, C

Рисунок 1

окрашен трипановым синим (образ WinXMorph).

Рисунок 2

Поперечное сечение рисунка 1.

электронная перепечатка

Сага о Винкс — Сезон 1 Эпизод 3 Краткое содержание и обзор

Тяжелые смертные надежды

Флэшбэки открывают эпизод 3 Fate: The Winx Saga, когда Блум необъяснимо видит образы своего рождения, в том числе странную женщину, говорящую ей «прийти и найти ее».Кто это мог быть? Что ж, следите за обновлениями, мы скоро узнаем.

Аиша предлагает поговорить с Террой и просмотреть ежегодники ее отца в поисках ответов. А до этого время урока. Фара говорит различным девушкам направить свои силы, пока мы видим всех в действии. Несмотря на проблемы Блум в прошлом, она легко управляет своим огнем, в то время как у Аиши возникают проблемы с контролем воды.

Говоря о проблемах, Саул продолжает страдать от причиняемых им ужасных черных усиков, пульсирующих по его спине.Пока ему удается скрыть свою боль.

У детей по-прежнему возникают проблемы: Терра сдерживается застенчивостью над своим телом, а Муса отвлекается присутствием Сэма.

Блум, однако, зациклена на видении, которое у нее было в начале эпизода. В ответ на это она решает отправиться в Каменный круг и призвать как можно больше магии. Однако Аиша не уверена, что это хорошая идея. Вместо этого они отправляются на вечеринку, где все наши феи вместе с мужчинами играют в пивной понг и пьют.

Блум узнает от Ривен, что Стелла использовала свою магию, чтобы ослепить своего лучшего друга, поэтому она быстро покидает территорию. Когда она это делает, она пробирается в заброшенное восточное крыло школы и находит портрет в подвале. Она понимает, что Даулинг лжет, и намеревается поспорить с ней по этому поводу. Учитывая, что Блум пьяна, Аиша говорит ей, что это плохая идея, но признает, что больше не собирается сдерживать Блум.

В то время как Бум приближается к выяснению правды, Муса целует Сэма, в то время как Терра спрашивает, могут ли она и Дэйн быть единым целым.Пока продолжается вся эта подростковая тревога, Беатрикс пользуется случаем и врывается в потайную комнату Даулинга, используя Каллума в качестве жертвенного ягненка.

Фара и Саул разговаривают с командой, которая охотится за Обгоревшим. Другой, конечно, учитывая, что Аиша и Блум уже убили последний эпизод. Что ж, на этот раз группе удается убить Обожженного, но это не тот, кто напал на Саула.

Блум делает свой выбор и все-таки противостоит Даулингу. Там она узнает, что Розалинда была директрисой до нее, а фотографии были спрятаны в заброшенном восточном крыле.Блум по понятным причинам подозрительно и требует поговорить с Розалиндой. Только очевидно, что она мертва много лет назад.

Блум, теперь переходящая от того, кто не может контролировать свои силы, к овладению ими за несколько коротких эпизодов, направляется к каменному кругу и в ярости разжигает пламя. Она быстро гасит их, когда появляется Скай и слышит, что она Подмена. Тем не менее, она также слышит в лесу шепот об сожженном, и они отправляются на поиски.

Все наши персонажи на вечеринке получают сообщение и бросаются в лес, где находятся Блум и Скай.В конце концов появляется Сгоревший, и наши волшебные феи объединяются со Скаем, чтобы остановить его. Появляется Даулинг и убивает существо. Она решает сделать выговор фейри утром, но пока им велят идти в свои комнаты.

Блум рассказывает Аише о своей ночи и о том, как она смогла контролировать свою магию. Учитывая, что она от природы обладает своими способностями, Аиша советует ей быть реалистичной и что ее родители могут не участвовать в какой-то сложной схеме.

Тем временем Фара говорит другим учителям, что Блум может стать самой могущественной феей, с которой они когда-либо сталкивались.Также ясно, что они солгали о смерти Розалинды. Доулинг предупреждает остальных, что Блум не может встретиться с ней, поскольку камера перемещается внутри волшебного портала в подвале Фары, чтобы увидеть Розалинду в плену.

Обзор серии

Эпизод 3 саги Винкс возвращается, с братскими вечеринками и непоследовательным построением мира — но, тем не менее, много приятной подростковой драмы.

Правила этого волшебного мира не установлены полностью, поэтому остается множество вопросов без ответов.Насколько далеко простирается власть Мусы? Если в этом мире есть волшебство, почему все общаются по мобильным телефонам? Если эти сотовые телефоны работают между мирами, как Блум и ее родители, то какого оператора сотовой связи она использует?

И если все эти студенты пользуются телефонами, что может помешать студентам сообщать о своем местоположении и использовать магию в историях Insta или Facebook? Мы установили, что фотографии можно загружать, но пока нет правил, запрещающих подобные вещи происходить в школе.

И, кстати, каковы на самом деле правила в этой школе? У Даулинга нет проблем с выпивкой, но неясно, где проходят границы с половиной студентов.

Я знаю, что в оригинальном мультсериале были затронуты некоторые из этих вопросов, но, учитывая, насколько это далеко от этого шоу, тем не менее, похоже, что сценарий написан слабо. Тем не менее, нам придется подождать и посмотреть, что ждет нашу избранницу и ее сказочных братьев в будущем.

Сага о Винкс? Вот все, что вам нужно знать

FATE: THE WINX SAGA, ‘Wither Into the Truth’ (Сезон 1, эп.105, эфир 22 января 2021 г.). фото: Джонатан Хессион / Netflix / Courtesy Everett Collection

Netflix’s Fate: The Winx Saga — таинственный, более мрачный взгляд на мультфильм начала 2000-х годов Winx Club , в центре которого находятся феи, посещающие волшебную школу-интернат под названием Алфея в потустороннем мире. . По мере того, как они овладевают своими силами, повсюду от использования огня до активации лоз, чтобы задушить плохих парней, персонажи также должны столкнуться с соперничеством, драматическим поведением мальчиков и самой большой проблемой из всех: сожженными.

Из первого эпизода мы можем заглянуть в силу Сожженных. Их называют существами, обладающими нечеловеческой скоростью и силой, чьи порезы приводят к «быстрым и серьезным» инфекциям, ведущим к верной смерти. Хуже того, они постоянно окружают барьер, окружающий Алфею, готовые атаковать. Мы даже узнаем, что один из наставников Алфеи, Саул Сильва, потерял своего отца из-за обгоревшего, причинив ему травму, которую он преодолевает, обучая Специалистов защищать Потусторонний мир от этих злых фигур.

Обожженные сразу изображаются злыми, от которых невозможно сбежать: в первом эпизоде показан пастух в лесу посреди ночи, на которого нападает Обожженный и убит ужасным образом. Сериал показывает кровавую реальность засады, оставляя труп пастуха невероятно окровавленным и деформированным от «остатков угля» — таким образом, мы знаем возможности этих загадочных существ. В этой сцене директриса Доулинг шокирована — она говорит, что обожженных не видели уже много лет, а Розалинда, предыдущая директриса Алфеи, которая тайно содержится в плену, убила их всех.

Связано: Судьба: У саги о Винкс есть много свободных концов, которые можно связать, если она будет продлена на 2 сезон

Поскольку Блум считает, что ее родители на самом деле не являются ее родителями, и идея быть подменышем ( фея, поменявшаяся при рождении с человеческим младенцем), она столкнулась с ужасающим Обожженным. Когда она входит в ворота на старом кладбище, чтобы попасть в Первый мир, на нее нападают, и Сожженный забирает кольцо ворот Стеллы. К счастью, Даулинг спасает ее, но сюжет только усиливается.Доулинг начинает связывать последнего Обгоревшего, которого видели 16 лет назад, и то, как Блум была найдена в младенчестве примерно в то же время. На всякий случай Даулинг решает поймать Обожженного и удержать его, в то время как таинственная первокурсница Беатрикс поражает его молнией.

История продолжается

Держа обожженного взаперти для допроса, Доулингу приходят видения, и его чуть не атакуют в сарае. Мы узнаем, что Харви, Сильва и Даулинг видели Burned Ones, когда они были в школе, убивая их и сражаясь в резне в Черном лесу.Пока Сожженный остается в цепи, они хотят просканировать его память. В конце концов, когда трио решает использовать армию королевы, чтобы доставить его в тюрьму, другая подменышка Беатрикс тайно освобождает зверя. Однако в то же время Блум направляет свои силы огня в сочетании с водометом Аиши, и они убивают Сгоревшего и возвращают кольцо. Сильва также подвергся нападению Обожженного, нанеся ему раны, которые можно было исцелить, только убив Обожженного, который причинил ему боль — это означает, что существует более одного монстра.

По теме: Чувствуешь себя феей после просмотра судьбы: Сага о Винкс? Jam to the Magic Soundtrack

Когда Блум переживает собственные трудности с принятием того, что она подменыш, она понимает, что слышит шепот своего имени и знает, когда рядом находится Обгоревший. Она помогает найти Обгоревшего, который причинил боль Сильве, но в конце концов Даулинг убивает его. Вскоре Беатрикс сообщает Блум, что Харви, Сильва и Даулинг разрушили целую деревню, чтобы убить Сожженных — или, по крайней мере, Розалинда хочет, чтобы она так поверила.Тем временем Обожженные бегут за барьер, а Доулинг и Сильва выходят в бой. Розалинда захватывает Алфею, забирая ее силу и позволяя Обожженным войти на территорию школы, поскольку барьер ослабевает.

К концу Блум понимает, что Обожженные хотят напасть на нее, поэтому, как только они кружат вокруг нее, она убивает их всех своими мощными силами. Блум уезжает в Калифорнию, чтобы сказать родителям, что она на самом деле подменыш, забирая с собой всю группу, и за это время Розалинда полностью меняет Алфею.. . убив и похоронив Даулинга. Более того, выясняется, что Сожженные когда-то были людьми — секрет, который Розалинда хранила все это время.

Табличка Кокса: Винкс и Хартнелл готовы к столкновению после жеребьевки барьеров в долине Муни — Спорт

Опубликовано 18 октября 2016 г. 10:17:54

Фотография: Винкс стильно поработала в долине Муни перед австралийским чемпионатом по весу к возрасту.(Изображение AAP: Трейси Ниарми) Связанная история: Винкс увеличивает количество побед до 12 в Колфилде Связанная история: Куда дальше у победителя Тернбулла Хартнелла?

Все готово к весеннему карнавалу после розыгрыша барьеров сегодняшнего утра на WS Cox Plate (2 040 м) за 3 миллиона долларов.

Винкс, действующая чемпионка в поисках своей 13-й победы подряд, вступит в долгожданную схватку с летающим импортёром Годольфина Хартнеллом.

Пара доминирует в ставках, Винкс затеняет их на уровне 1,90 доллара, а Хартнелл — на уровне 3 долларов, и они прыгают с третьего и седьмого барьеров соответственно.

Поле для пластины Кокса

Happy Trails (10)
Black Heart Bart (6)
Hartnell (7)
Hauraki (8)
Happy Clapper (4)
Vadamos (2)
Awesome Рок (5)
Винкс (3)
Люсия Валентина (9)
Янки Роуз (1)

Винкс была первой лошадью, вышедшей на след во вторник на «Завтрак с лучшими» в долине Муни и стильно поработала под руководством Хью Боумена.

«Это просто вопрос того, чтобы двигатель работал, а не взорвался», — сказал тренер Крис Уоллер.

Он сказал, что очень уважает Хартнелла, но Плейт далек от соревнований на двух лошадях.

«Есть также лошади, такие как Вадамос и Янки Роуз … под давлением великого подъемника Кокса Плейта.

« Но мы были там, мы знаем, что у нас есть то, что нужно.

«С момента ее последнего старта все шло по плану, и она в выигрышной форме.

Хартнелл, который объединил три победы с большим отрывом, остался во Флемингтоне для работы на трассе под бдительным оком Джона О’Ши.

«Нет никаких сомнений в том, что это отличная гонка, но Винкс — заслуженный фаворит, и ей нравится Долина, и каждый раз, когда они встречались, она вытирала его полотенцем, — сказал О’Ши.

«Мы просто счастливы быть частью этого.

«Мы просто чувствуем, что он находится на подъеме с тех пор, как был в Мельбурне, и, надеюсь, мы сможем принять его прямо в тот же день.

Товарищ Хартнелла по конюшне Хаураки будет ездить на Дуэйне Данне после того, как Крейг Уильямс не смог добиться отмены дисквалификации в прошлую субботу. прошлогодний победитель Chautauqua стартует с первого выхода.

Темы: скачки, спорт мельбурн-3000, луны-пруды-3039, Vic

Объяснение концовки «Судьба: Сага о Винкс»: что ждет Блум дальше?

Fate: The Winx Saga рассказывает историю Блум (Эбигейл Коуэн), калифорнийской девушки, которая обнаруживает, что ее мир перевернут, когда она обнаруживает, что она фея.В частности, огненная фея. Почему Блум вырос как человек, ничего не знающий о мистическом «Потустороннем мире», — это одна из ключевых загадок, лежащих в основе первого сезона сериала Fate: The Winx Saga . Оказывается, прошлое Блум еще мрачнее, чем она могла изначально себе представить, и ее собственная судьба неразрывно связана с гнусной Беатрикс (Сэди Совералл) и ее наставницей, таинственной Розалиндой (Лесли Шарп).

** ОСНОВНЫЕ СПОЙЛЕРЫ ДЛЯ

FATE: THE WINX SAGA SEASON 1 ВПЕРЕДИ! **

На протяжении шести эпизодов сериала Fate: The Winx Saga Блум приходится считаться не только с откровением о том, что она подменыш — фея, которую похитили и обменяли с настоящим человеческим младенцем, но и с этой Алфеей. Директор колледжа Фара Даулинг (Ева Бест), кажется, лжет ей обо всем.В какой-то момент подлая Беатрикс объясняет Блум, что они оба сироты из города под названием Астер-Дейл. Его ни в чем не повинные жители, очевидно, были уничтожены в результате молниеносной атаки, которую приказала Розалинда и осуществила ее тогдашние лейтенанты Фара и Сильва (Роберт Джеймс-Коллиер). Есть ли у Блум шанс отомстить за смерть родителей? Освобождение Розалинды, женщины, которая увела ее от Астер Дейл и оставила с милой калифорнийской парой, из ее тюрьмы в офисе Фары.

Однако не все так, как кажется, и финал Fate: The Winx Saga имеет несколько ужасных (и ужасно запутанных) поворотов.

Так что же происходит в финале Fate: The Winx Saga ? Кто живет, кто умирает и кто буквально воскресает из мертвых? Судьба : объяснение концовки саги Винкс…

Фото: Netflix

СУДЬБА: WINX SAGA ОБЪЯСНЕНИЕ КОНЦА: КАКОВЫ БОЛЬШОЙ ПЛАН РОЗАЛИНД относительно BLOOM?

(Делает глубокий вдох… выдыхает… и пытается выложить…)

Итак, Розалинда была директором в Алфее и волшебным стратегом, возглавлявшим предыдущее поколение — Фарах, Сильва, отец Скай, отец Терры — в битве против Сожженных.Однако она перешла черту, когда потребовала, чтобы ее солдаты разрушили город Астер-Дейл. Фарах и Сильва возмутила мысль о том, что они убили невинных жителей деревни, чтобы убить Сожженных, прячущихся в городе. В конце концов, они восстали против Розалинды, не подозревая, что до взрыва она вызвала к жизни двух младенцев из Астер-Дейл. Этими младенцами были Блум и Беатрикс.

Розалинда отдала Блум на попечение калифорнийской паре, которая вот-вот потеряет своего настоящего ребенка, тем самым предоставив могущественной огненной фее тайное место для взросления.Розалинда рассчитывала на то, что силы Блум проявятся в Алфее, и даже планировала, что ее друзья выпустят Обожженных, просто чтобы проверить растущие силы Блум. Обожженных привлекает древняя магия Блума — у нее есть крылья! — и Блум в состоянии снять древнее проклятие, которое в первую очередь превратило Обожженных в Обожженных.

Однако здесь все становится очень сложным. Розалинда хочет использовать Блум как оружие для более темного зла на горизонте. Тот, о котором даже не знает Фара.Не только это, но и вся ситуация в Астер-Дейл была даже сложнее, чем кто-либо думал. Так случилось, что люди в городе были не невинными, а Кровавыми Ведьмами. Люди, которые хотели украсть магию фей. Они уже похитили Блум, зная, что она особенная.

Очевидно, это откровение потрясает Фару и Сильву, которые думали, что их попросили совершить военное преступление, и усложняет ситуацию для Сильвы, которую также супер-пупер обманула Команда Розалинды…

Фото: Netflix

ЧТО СЛУЧИЛОСЬ С АНДРЕАСОМ В

FATE: THE WINX SAGA ?

Одна из самых мрачных трагедий, поразивших последнее поколение в колледже Алфеи, связана с инструктором-специалистом Сильвой и красивым Скаем (Дэнни Гриффин).Поскольку его собственный отец Андреас (Кен Дукен) погиб в бою, Скай вырос, считая Сильву самым близким к отцу человеком. Сильва и Андреас были лучшими друзьями. Однако мы узнаем, что дружба приняла мрачный оборот в финале Fate: The Winx Saga .

Как оказалось, Сильва убил Андреаса в ожесточенной битве за судьбу Астер Дейл. Сильва пришел в ужас от призыва Розалинды разрушить весь город и попытался остановить его. Его остановил Андреас, который, несмотря ни на что, последует за Розалиндой.Два друга подрались, и Сильва был вынужден убить Андреаса в порядке самообороны. По крайней мере … так думал Сильва.

В финале сериала Fate: The Winx Saga выясняется, что Андреас не умер! Он оправился от травм и жил в подполье, воспитывая Беатрикс как свою собственную. В конце концов, он возвращается в Алфею и утверждает, что Сильва пытался его убить. Это означает, что солярианская армия арестовывает Сильву. Но возвращение Андреаса в Алфею еще более мрачно, поскольку оно представляет собой переворот!

КТО ЖИВЕТ И УМИРАЕТ В

FATE: THE WINX SAGA FINALE? Пока девушки Блум и Винкс отдыхают в солнечной Калифорнии, в Алфее творится что-то действительно мрачное.Розалинда убивает Фару и прячет ее труп среди трупов Сожженных, побежденных Блум. При поддержке Солярианской Королевы Луны (Кейт Флитвуд) и возвращения Андреаса Розалинда берет на себя управление школой. Блум и ее друзья возвращаются в кампус и обнаруживают, что все изменилось. Вывод очевиден: при Розалинде Алфея больше не будет безопасным местом для обучения и развития фей и специалистов. Вместо этого это будет жестокая военная школа.

До сих пор неясно, является ли Розалинда злом или творит много зла для большего блага.Однако тот факт, что она убила Фару, ставит ее в категорию плохих парней. Мы надеемся, что если есть Fate: The Winx Saga Season 2, то Блум и ее друзьям удастся сохранить свои души.

Смотреть Fate: The Winx Saga на Netflix

CD4 + Т-клеток, экспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, способствуют сохранению ВИЧ во время АРТ

Abstract

ВИЧ сохраняется в небольшом пуле латентно инфицированных клеток, несмотря на антиретровирусную терапию (АРТ).Идентификация клеточных маркеров, экспрессируемых на поверхности этих клеток, может привести к новым терапевтическим стратегиям для уменьшения размера резервуара ВИЧ. Мы предположили, что Т-клетки CD4 ⁺, экспрессирующие молекулы иммунных контрольных точек, будут обогащены ВИЧ-инфицированными клетками у лиц, получающих супрессивную АРТ. Уровни экспрессии 7 молекул иммунных контрольных точек (PD-1, CTLA-4, LAG-3, TIGIT, TIM-3, CD160 и 2B4), а также 4 маркеров персистенции ВИЧ (интегрированная и общая ДНК ВИЧ, круги 2-LTR и ассоциированная с клетками несплицированная РНК ВИЧ) измеряли в PBMC у 48 индивидуумов с подавленным вирусом.Используя модели отрицательной биномиальной регрессии, мы идентифицировали PD-1, TIGIT и LAG-3 как молекулы иммунных контрольных точек, положительно связанные с частотой CD4 ⁺ Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ. Частота CD4 ⁺ Т-клеток, коэкспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, независимо предсказывала частоту клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ. Количественная оценка геномов ВИЧ в высокоочищенных субпопуляциях клеток крови также показала, что экспрессия PD-1, TIGIT и LAG-3 была связана с ВИЧ-инфицированными клетками в различных субнаборах Т-клеток CD4 ⁺ памяти.CD4 ⁺ Т-клетки, коэкспрессирующие три маркера, были высоко обогащены интегрированными вирусными геномами (медиана в 8,2 раза по сравнению с общим количеством CD4 ⁺ Т-клеток). Важно отметить, что большинство клеток, несущих индуцибельные геномы ВИЧ, экспрессировали по крайней мере один из этих маркеров (средний вклад клеток, экспрессирующих LAG-3, PD-1 или TIGIT, в индуцибельный резервуар = 76%). Наши данные свидетельствуют о том, что CD4 ⁺ Т-клетки, экспрессирующие PD-1, TIGIT и LAG-3 по отдельности или в комбинации, обогащаются стойким ВИЧ во время АРТ, и предполагают, что блокаторы иммунных контрольных точек, направленные против этих рецепторов, могут представлять собой ценные инструменты для нацеливания на латентно инфицированных. клетки у людей с подавленным вирусом.

Сведения об авторе

Сохранение ВИЧ в небольшом пуле долгоживущих латентно инфицированных покоящихся CD4 ⁺ Т-клеток является основным препятствием для уничтожения вируса. Идентификация клеточных маркеров, которые преимущественно экспрессируются на поверхности латентно инфицированных клеток, может привести к новым терапевтическим стратегиям лечения ВИЧ-инфекции. Мы определили PD-1, TIGIT и LAG-3 как маркеры, предпочтительно экспрессируемые на поверхности инфицированных клеток у лиц, получающих АРТ. CD4 ⁺ Т-клетки, коэкспрессирующие эти маркеры, были высоко обогащены клетками, несущими ВИЧ.Наши результаты показывают, что PD-1, TIGIT и LAG-3 могут представлять собой новые молекулярные мишени, препятствующие сохранению ВИЧ во время АРТ.

Образец цитирования: Fromentin R, Bakeman W., Lawani MB, Khoury G, Hartogensis W, DaFonseca S, et al. (2016) CD4 ⁺ Т-клетки, экспрессирующие PD-1, TIGIT и LAG-3, способствуют сохранению ВИЧ во время АРТ. PLoS Pathog 12 (7): e1005761. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005761

Редактор: Daniel C.Douek, Центр исследования вакцин, США

Поступила: 7 марта 2016 г .; Принята к печати: 20 июня 2016 г .; Опубликован: 14 июля 2016 г.

Авторские права: © 2016 Fromentin et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Эта работа была поддержана Исследовательским центром СПИДа Делани (DARE) по поиску лекарства 1U19AI096109, грантом NIH 1R21AI113096 (NC, SRL, SD, RPS), грантом NIH R01 AI110334, Центром СПИДа UCSF-GIVI. Грант на исследования P30AI027763 и Фонд исследований СПИДа (Исследовательский консорциум amfAR по искоренению ВИЧ (108687-54-RGRL и 108928-56-RGRL). РФ поддерживается стипендией amfAR (108264-51-RFRL). SRL поддерживается стипендия практикующего врача от Национального совета по здравоохранению и медицинским исследованиям (NHMRC) Австралии.GK является стипендиатом биомедицинской стипендии NHMRC Dora Lush для аспирантов. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Хотя антиретровирусная терапия (АРТ) очень эффективна в подавлении репликации ВИЧ, резервуары вируса сохраняются, несмотря на лечение, и приводят к быстрому отскоку вируса при прерывании АРТ [1–4].Важным шагом к достижению естественного контроля репликации ВИЧ после прекращения АРТ могло бы стать устранение или, по крайней мере, сокращение количества долгоживущих инфицированных клеток, из которых ВИЧ возобновляет инфекцию. Характеристика маркеров клеточной поверхности, которые могут идентифицировать ВИЧ-инфицированные клетки, сохраняющиеся во время АРТ, является приоритетным направлением исследований в области лечения ВИЧ [5], так как это может привести к разработке новых стратегий искоренения.

Несколько подмножеств CD4 ⁺ Т-клеток несут репликационно-компетентный ВИЧ во время АРТ.Эти CD4 ⁺ Т-клетки обычно определяют на основе их стадии дифференцировки [6-8], функциональности или потенциала хоминга [9,10]. Центральная память (T _CM) и переходная память (T _TM) CD4 ⁺ Т-клетки были идентифицированы как основные клеточные резервуары ВИЧ во время АРТ [6]. Совсем недавно было определено, что менее дифференцированная подгруппа долгоживущих клеток с высокой способностью к самообновлению, стволовые клетки памяти CD4 ⁺ Т-клетки (T _SCM), вносят основной вклад в долгосрочное сохранение ВИЧ. [7,8].Функциональная и самонаводящая способность Т-клеток CD4 ⁺ также определяет их способность служить постоянными резервуарами для ВИЧ: Т-клетки Th27 и Th2 / Th27 CD4 ⁺, а также клетки, экспрессирующие CCR6 и CXCR3, демонстрируют возрастающий вклад в вирусный резервуар. с длительностью АРТ [11,12].

Молекулы иммунных контрольных точек (IC) являются коингибиторными рецепторами, которые подавляют иммунные ответы, чтобы предотвратить гипериммунную активацию, минимизировать побочные повреждения и поддерживать периферическую самотолерантность [13].ICs активируются при активации Т-клеток и сдерживают эффекторный ответ посредством ингибирования обратной связи. Избыточная экспрессия этих молекул связана с истощением и дисфункцией Т-клеток при раке и хронических вирусных инфекциях, включая ВИЧ [14-17]. Мы предположили, что ИК, благодаря своей способности ингибировать активацию Т-клеток, будут способствовать латентному периоду ВИЧ во время АРТ, и что Т-клетки CD4 ⁺, экспрессирующие ИК, будут обогащены устойчивым ВИЧ у лиц, получающих АРТ.

Мы сосредоточили наш анализ на 7 IC, а именно PD-1 (запрограммированная гибель клеток-1), CTLA-4 (цитотоксический T-лимфоцит-ассоциированный белок 4), LAG-3 (ген активации лимфоцитов 3), TIGIT (T-клеточный иммуноглобулин и домен ITIM), TIM-3 (Т-клеточный иммуноглобулин и муцин 3), CD160 и 2B4 (CD244).

PD-1, член суперсемейства B7-CD28, реализует программу ингибирования, которая блокирует дальнейшую TCR-индуцированную пролиферацию Т-клеток и продукцию цитокинов [18,19]. При ВИЧ-инфекции высокие уровни PD-1 связаны с истощением Т-клеток [14–16,20] и неполным иммунологическим ответом на АРТ [21]. CTLA-4, гомолог CD28, регулирует амплитуду активации Т-клеток, опережая CD28 в связывании CD80 и CD86, а также активно доставляя тормозные сигналы к Т-клеткам [13]. TIGIT, который также принадлежит к суперсемейству B7 / CD28, действует как ко-ингибирующая молекула, непосредственно подавляя пролиферацию Т-клеток человека [22], но также модулируя секрецию цитокинов DC, уменьшая IL-12 и увеличивая IL-10. постановки [23].TIGIT недавно был связан с дисфункцией CD8 ⁺ Т-клеток во время ВИЧ-инфекции [24]. Экспрессия 2B4 (CD244), члена сигнальной молекулы активации лимфоцитов (SLAM), также модулируется на Т-клетках во время ВИЧ-инфекции [17,25]. LAG-3, член суперсемейства иммуноглобулинов, структурно очень гомологичен рецептору CD4 и разделяет MHC-II в качестве лиганда [26]. Его экспрессия на Т-регуляторных клетках играет роль в модуляции гомеостаза Т-клеток и ответных реакций эффекторных Т-клеток [27,28].TIM-3 также является членом суперсемейства иммуноглобулинов, и его экспрессия повышена на ВИЧ-специфических CD8 ⁺ и CD4 ⁺ Т-клетках [29,30]. Наконец, CD160, связываясь со своим лигандом, входящим в состав вируса герпеса (HVEM), атипичным членом суперсемейства рецепторов TNF, доставляет ко-ингибирующий сигнал к Т-клеткам CD4 ⁺ или Т-лимфоцитам CD8 ⁺, подавляя их активацию. у ВИЧ-инфицированных [31,32].

Чтобы оценить взаимосвязь между экспрессией этих ИК и персистенцией ВИЧ, мы проанализировали взаимосвязь между их уровнями экспрессии на Т-клетках CD4 ⁺ и размером резервуара ВИЧ у лиц, получающих АРТ в течение как минимум 3 лет.

Материалы и методы

Участники исследования

Сорок восемь ВИЧ-инфицированных участников, получающих супрессивную АРТ, были набраны в Калифорнийском университете в Сан-Франциско (UCSF) для этого поперечного исследования. Участники получали АРТ более 3 лет, имели CD4 ⁺ Т-лимфоцитов> 350 клеток / мкл и РНК ВИЧ <40 копий / мл по данным ПЦР Abbott на ВИЧ-1 в реальном времени в течение как минимум 3 лет. Цельную кровь (50 мл) собирали регулярным забором крови.Для экспериментов по сортировке клеток 27 ВИЧ-инфицированных были зачислены в UCSF и VGTIFL и прошли лейкаферез.

Заявление об этике

Все субъекты подписали формы информированного согласия, одобренные наблюдательными советами UCSF и Martin Memorial Health Systems (IRB № 10–1320, Ref № 068192 и FWA № 00004139, соответственно).

Иммунофенотипирование

PBMC были выделены из периферической крови и лейкафереза с использованием ранее описанных методов [6,33]. Криоконсервированные PBMC размораживали, промывали и окрашивали для фенотипирования или сортировки клеток.Две панели антител использовали для измерения экспрессии IC в подмножествах CD4 + Т-клеток памяти. Один и тот же остов антитела был использован в двух панелях: CD3-Alexa700 (клон UCHT1, BD # 557943), CD4-QDot605 (клон S3.5, Invitrogen # Q10008), CD8-PB (клон RPA-T8, BD # 558207). , CD14-V500 (клон M5E2, BD # 561391), CD19-AmCyan (клон SJ25C1, BD # 339190), маркер LIVE / DEAD Aqua (Invitrogen # L34957), CD45RA-APC-H7 (клон HI100, BD # 560674), CD27-BV650 (клон O323, Biolegend # 302828) и CCR7-PE-Cy7 (клон 3D12, BD # 557648).К этому основанию были добавлены следующие антитела: PD-1-AF647 (клон Eh22.1, BD # 560838), CTLA-4-PE (клон BNI3, BD # 555853), LAG-3-FITC (R&D # FAB2319F), TIGIT-PerCP-eF710 (клон MBSA43, eBioscience # 46-9500-41), TIM-3-PE (клон F38-2E2, Biolegend # 345006), CD160-AF488 (клон By55, eBioscience # 53–1609), 2B4- PerCP-Cy5.5 (клон C1.7, Biolegend # 329515). Для экспрессии всех IC ворота были определены с использованием контрольных значений флуоресценции минус один. Подмножества CD4 ⁺ Т-клеток были идентифицированы по экспрессии CD27, CD45RA и CCR7 на Т-клетках CD4 ⁺ после исключения положительных по дампу клеток (LIVE / DEAD, CD14 и CD19).IC измеряли в ограниченных субпопуляциях CD4 ⁺ Т-клеток, включая наивные CD4 ⁺ Т-клетки (CD3 + CD8-CD4 + CD45RA + CCR7 + CD27 +), центральную память CD4 ⁺ Т-клетки (CD3 + CD8-CD4 + CD45RA-CCR7 + CD27 +), переходная память CD4 ⁺ Т-клетки (CD3 + CD8-CD4 + CD45RA-CCR7-CD27 +), эффекторная память CD4 ⁺ Т-клетки (CD3 + CD8-CD4 + CD45RA-CCR7-CD27- ) и терминально дифференцированные CD4 ⁺ Т-клетки (CD3 + CD8-CD4 + CD45RA + CCR7-CD27-). Данные были получены на проточном цитометре BD LSR II с использованием программного обеспечения FACSDiva (Becton Dickinson) и проанализированы с использованием Flow Jo версии 9 (Treestar).

Сортировка клеток

Центральная, переходная и эффекторная память CD4 ⁺ Т-клетки были отсортированы на основе их экспрессии PD-1, TIGIT или LAG-3. Антитела, используемые для сортировки, были аналогичны антителам, используемым для фенотипирования, за исключением CD27-QDot655 (клон CLB-27/1, Invitrogen # Q10066). Во второй серии экспериментов Т-клетки общей памяти CD4 ⁺ (CD3 + CD4 + CD45RA-) были отсортированы на основе их экспрессии PD-1, TIGIT и LAG-3. Отсортированные клетки собирали с помощью сортировщика ARIA FACS (Becton Dickinson).

Выделение всего CD4

⁺ Т-клеток

Всего CD4 ⁺ Т-клеток выделяли из криоконсервированных PBMC с использованием магнитного истощения согласно протоколу производителя (Stem Cell Technologies, Ванкувер, Канада).

Количественное определение интегрированных, общих и 2-LTR кругов ДНК ВИЧ, ассоциированной с клеткой несплайсированной РНК ВИЧ и Tat / rev индуцибельной многократно сплайсированной РНК ВИЧ

Всего CD4 ⁺ Т-клеток или отсортированных CD4 ⁺ субпопуляций Т-клеток использовали для измерения частоты клеток, несущих ДНК ВИЧ (общие, интегрированные и 2-LTR-круги), с помощью вложенной ПЦР в реальном времени, как описано ранее [34] ( S1A Текст).

РНК CA-US измеряли с помощью вложенной ПЦР в реальном времени, как описано ранее [35]. Частоту появления CD4 ⁺ Т-клеток с индуцибельной многократно сплайсированной РНК ВИЧ определяли с помощью анализа индуцибельного лимитирующего разведения Tat / rev (TILDA) [36].

Статистический анализ

Распределение данных оценивалось с помощью описательной статистики и точечных диаграмм. Отрицательные модели биномиальной регрессии были запущены для каждого набора сравнений, при этом процент CD4 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих IC, был предиктором, а показатель персистенции ВИЧ — результатом.Мы выбрали этот подход по причинам, описанным ранее [12, 35], и для согласованности с предыдущими публикациями (S1B Text). Этот подход позволил нам подобрать модели с поправкой на эффекты абсолютного текущего или надира Т-лимфоцитов CD4 ⁺, которые были исследованы для всех комбинаций предикторов IC и показателей устойчивости ВИЧ. Кроме того, модели отрицательной биномиальной регрессии учитывают, что количество копий / входных данных измеряется с меньшей точностью, когда количество копий меньше, а количество входных данных меньше.Эти методы также позволяют надлежащим образом количественно использовать случаи, когда в анализируемом образце присутствовали нулевые копии, без необходимости специальных модификаций, позволяющих производить логарифмы. Мы не оценивали результаты альтернативных методов анализа и не выбирали методы ретроспективно на основе полученных ими результатов. Анализы проводились в Stata версии 13.1 (Stata Corp, College Station, TX).

Для анализа результатов TILDA мы оценили внутриличностную кратность разницы в TILDA между двумя проанализированными подмножествами клеток (CD4 ⁺ Т-клетки памяти, экспрессирующие любые ИС по сравнению с отсутствием ИС) путем подбора модели максимального правдоподобия к необработанным данным о числах. положительных и отрицательных лунок при каждом разведении (текст S1C).

Результаты

PD-1, TIGIT и LAG-3 связаны с маркерами персистенции ВИЧ во время АРТ

Чтобы определить взаимосвязь между ИК и персистентностью ВИЧ, 48 ВИЧ-инфицированных участников получали супрессивную АРТ в течение среднего времени (IQR) 8,5 лет (5,0–12,4) и среднего числа CD4 ⁺ T-клеток (IQR) 684 клеток / мкл (533–858) были набраны (таблица 1). Экспрессию 7 IC на CD4 ⁺ Т-клетках (PD-1, CTLA-4, LAG-3, TIGIT, TIM-3, CD160 и 2B4) измеряли с помощью многопараметрической проточной цитометрии (S1 фиг.).Частоты CD4 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих эти IC, были различными (медиана (IQR) 16,7% (13,2–22,7), 12,2% (8,8–16,4), 12,0% (8,9–16,1), 9,5% (3,5–18,5)). ), 1,1% (0,8–2,5), 0,8% (0,6–1,5) и 0,7% (0,6–1,0) для TIGIT, PD-1, LAG-3, 2B4, CD160, TIM-3 и CTLA-4 соответственно) ( Рис 1A).

Рис. 1. PD-1, TIGIT и LAG-3 связаны с вирусологическими маркерами персистенции ВИЧ во время АРТ.

(A) Экспрессия 7 IC на CD4 ⁺ Т-лимфоцитах у лиц, получающих супрессивную АРТ (n = 48).Данные представлены в виде процента CD4 ⁺ Т-клеток, а горизонтальные полосы указывают медианные значения с интерквартильными диапазонами. (B) Размер резервуара ВИЧ, измеренный с помощью интегрированной ДНК ВИЧ, общей ДНК ВИЧ, кружков 2-LTR, представленных в виде копий на миллион CD4 ⁺ Т-клеток, и ассоциированной с клеткой РНК ВИЧ в США, представленных в виде копий на миллион копий 18S. Горизонтальные полосы указывают медианные значения с интерквартильными диапазонами, а светлые кружки представляют предел обнаружения в отрицательных выборках (на основе ввода ячейки).(C), (D), (E) Связь между частотой CD4 ⁺ T-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, и частотой CD4 ⁺ T-клеток, экспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, соответственно. Значения P были получены из отрицательного биномиального регрессионного анализа. Размеры эффекта для ассоциаций следующие: (C) 2-кратное увеличение процента Т-клеток PD-1 ⁺ CD4 ⁺ было связано с 1,43-кратным увеличением частоты CD4 ⁺ Т-клеток. несущие интегрированную ДНК ВИЧ, (D) в 2 раза более высокий процент TIGIT ⁺ CD4 ⁺ Т-клеток был связан с 1.В 91 раз более высокая интегрированная ДНК ВИЧ и (E) в 2 раза более высокий процент LAG-3 ⁺ CD4 ⁺ Т-клеток были связаны с 1,62-кратной более высокой интегрированной ДНК ВИЧ. Белые кружки представляют предел обнаружения в отрицательных образцах (на основе ввода ячейки).

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005761.g001

Размер резервуара ВИЧ определяли путем измерения частот CD4 ⁺ Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, общую ДНК ВИЧ и 2-LTR кружки, а также ассоциированная с клетками несплайсированная (CA-US) РНК ВИЧ (рис. 1B и таблица S1).Полная ДНК ВИЧ и ассоциированная с клетками РНК ВИЧ в США были обнаружены во всех протестированных образцах, тогда как интегрированная ДНК ВИЧ и круги 2-LTR были обнаружены в 98% и 80% образцов соответственно.

Мы оценили связь между маркерами персистенции ВИЧ и частотами CD4 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих ИК, с использованием модели отрицательной биномиальной регрессии, которая была скорректирована с учетом текущего и минимального количества Т-лимфоцитов CD4 ⁺ при наличии показаний (Таблица 2 и S2 –S4 Таблицы). Используя эти адаптированные аналитические методы для измерения резервуаров ВИЧ, мы идентифицировали 3 IC, экспрессия которых на Т-лимфоцитах CD4 ⁺ была статистически значимо связана с частотой Т-лимфоцитов CD4 ⁺, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, а именно PD-1, TIGIT. и LAG-3 (рис. 1C – 1E и таблица 2).Эти корреляции сохранялись после поправки на надир CD4 ⁺ Т-лимфоцитов, но больше не были значимыми после поправки на текущее количество Т-лимфоцитов CD4 ⁺, клинический параметр, тесно связанный с размером резервуара во время АРТ [6,37 , 38].

Частота PD-1, экспрессирующих CD4 ⁺ Т-клеток, также была связана с частотой CD4 ⁺ Т-клеток, несущих полную ДНК ВИЧ (таблица S3), но лишь незначительно (1,23-кратный эффект, p = 0,07), когда модель была скорректирована с учетом текущего количества Т-клеток CD4 ⁺.CA-US ВИЧ РНК и круги 2-LTR не показали статистически значимой корреляции с какими-либо уровнями экспрессии IC, за исключением отрицательной связи между частотой CD160 ⁺ Т-клеток CD4 ⁺ и оставшимися кругами 2-LTR. статистически значимо после поправки на текущее и минимальное количество Т-лимфоцитов CD4 ⁺ (таблицы S3 и S4).

Коэкспрессия PD-1, TIGIT и LAG-3 является маркером персистенции ВИЧ во время АРТ

IC коэкспрессируются на истощенных CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клетках во время нелеченой ВИЧ-инфекции [39].Используя стратегию логического стробирования, мы определили частоту CD4 ⁺ Т-клеток, коэкспрессирующих PD-1 и / или TIGIT и / или LAG-3, в нашей когорте из 48 ВИЧ-инфицированных участников, получающих супрессивную АРТ (рис. 2A и 2B. ). Большинство CD4 ⁺ Т-клеток не экспрессировали ни одного из этих маркеров (медиана (IQR) 65,8% (59,0–72,4)) (таблица S6). Менее 10% (8,5%) Т-клеток CD4 ⁺ экспрессировали более одного из этих маркеров, а 0,9% одновременно экспрессировали PD-1, TIGIT и LAG-3.Мы также оценили, связана ли частота этих дискретных субпопуляций Т-лимфоцитов CD4 ⁺ с маркерами персистенции ВИЧ. Используя модель отрицательной биномиальной регрессии, мы обнаружили, что частота CD4 ⁺ Т-клеток, не экспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, сильно и отрицательно коррелировала с частотой CD4 ⁺ Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ ( p = 0,002, Таблица 3 и Рис. 2C). Напротив, частота CD4 ⁺ Т-клеток, коэкспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, была сильно и положительно связана с частотой CD4 ⁺ Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ (p = 0.001, Таблица 3 и Рис. 2F). Интересно, что частоты CD4 ⁺ Т-клеток, коэкспрессирующих TIGIT с PD-1 или LAG-3, также были положительно связаны с частотой CD4 ⁺ Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ (p = 0,002 и p = 0,029. соответственно, таблица 3 и рис. 2D и 2E). Хотя некоторые из этих ассоциаций были менее или более не статистически значимыми, когда модель была скорректирована с учетом текущего количества Т-лимфоцитов CD4 ⁺, связь между размером резервуара ВИЧ и частотой тройных положительных клеток (PD-1 + , LAG-3 + и TIGIT +) оставались статистически значимыми после корректировки (p = 0.038). Корректировка продолжительности АРТ не привела к каким-либо существенным изменениям результатов нескорректированного анализа (все кратные эффекты с поправкой на продолжительность АРТ в пределах 7% от нескорректированных). В совокупности эти результаты показывают, что совместная экспрессия PD-1, TIGIT и LAG-3 идентифицирует уникальное подмножество Т-клеток CD4 ⁺, которое точно предсказывает частоту клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, во время АРТ.

Рис. 2. Коэкспрессия PD-1, TIGIT и LAG-3 является маркером персистенции ВИЧ во время АРТ.

(A) Частота CD4 ⁺ Т-клеток, коэкспрессирующих PD-1 и / или TIGIT и / или LAG-3 (PD-1 / TIGIT / LAG-3 triple– (PTL-), PD-1 single + (P +), TIGIT одиночный + (T +), LAG-3 одиночный + (L +), PD-1 / TIGIT двойной + (P + T +), TIGIT / LAG-3 двойной + (T + L +), PD-1 / LAG-3 double + (P + L +) и PD-1 / TIGIT / LAG-3 triple + (P + T + L +)), определенные с помощью логического стробирования в когорте 1 (n = 48). Горизонтальные полосы указывают медианные значения с интерквартильными диапазонами. (B) Диаграмма Венна, показывающая паттерн коэкспрессии PD-1, TIGIT и LAG-3.(C), (D), (E), (F) Связь между частотой CD4 ⁺ Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, и частотой CD4 ⁺ T-клеток, не экспрессирующих ни один из этих маркеров (тройной -), PD-1 и TIGIT (двойной +), TIGIT и LAG-3 (двойной +) и PD-1 и TIGIT и LAG-3 (тройной +) соответственно. Значения P были получены из отрицательного биномиального регрессионного анализа. Размеры эффекта для ассоциаций следующие: (C) 0,69-кратное изменение интегрированной ДНК ВИЧ для увеличения на 1 пункт процента тройных PD-1 / TIGIT / LAG-3 — CD4 ⁺ Т-клеток, (D) 1 .18-кратное изменение интегрированной ДНК ВИЧ для увеличения на 1 пункт процента PD-1 / TIGIT double + CD4 ⁺ Т-клеток, (E) 1,30-кратное изменение интегрированной ДНК ВИЧ для увеличения на 1 пункт процента TIGIT / LAG-3 double + CD4 ⁺ Т-клетки и (F) 1,94-кратное изменение интегрированной ДНК ВИЧ для увеличения на 1 пункт процента PD-1 / TIGIT / LAG-3 triple + CD4 ⁺ T-клеток. Белые кружки представляют предел обнаружения в отрицательных образцах (на основе ввода ячейки).

https: // doi.org / 10.1371 / journal.ppat.1005761.g002

Экспрессии PD-1, TIGIT и LAG-3 связаны с ВИЧ-инфицированными клетками в различных подмножествах Т-клеток памяти CD4

⁺ во время АРТ

ВИЧ сохраняется преимущественно в субпопуляциях CD4 ⁺ Т-клеток памяти [6–8]. Чтобы определить роль, которую играют ИК в каждом индивидуальном подмножестве Т-лимфоцитов CD4 ⁺, мы сначала проанализировали экспрессию PD-1, TIGIT и LAG-3, трех ИК, которые мы идентифицировали как связанные с персистенцией ВИЧ. (T _N), центральная память (T _CM), переходная память (T _TM), эффекторная память (T _EM) и терминально дифференцированные (T _TD) клетки у 48 ВИЧ-инфицированных участников ( Когорта 1: клинические характеристики в таблице 1) (рис. 3A, 3B и 3C соответственно).Как и ожидалось, клетки T _N экспрессировали низкие уровни этих IC. Частота CD4 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих PD-1 или LAG-3, увеличивалась с дифференцировкой, при этом клетки T _EM отображали самые высокие уровни экспрессии этих маркеров. Самая высокая частота клеток TIGIT ⁺ была обнаружена в подмножестве T _TM. Эти результаты продемонстрировали, что подмножества клеток памяти, которые, как ранее было показано, содержат стойкий ВИЧ во время АРТ, экспрессируют PD-1, TIGIT и LAG-3.

Рис. 3. PD-1, TIGIT и LAG-3 идентифицируют ВИЧ-инфицированные клетки в различных субпопуляциях Т-клеток CD4 ⁺ памяти во время АРТ.

(A), (B), (C) Частоты памяти CD4 ⁺ Подмножества Т-клеток (наивные (T _N), центральная память (T _CM), переходная память (T _TM) эффекторная память (T _EM) и терминально дифференцированная (T _D)), экспрессирующие PD-1, TIGIT или LAG-3 соответственно. Горизонтальные полосы указывают медианные значения с интерквартильными диапазонами.(D), (E), (F) Частоты клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ в T _CM, T _TM и T _EM CD4 ⁺ Подмножества Т-клеток, отсортированные на основе их экспрессии PD-1 (n = 12), TIGIT (n = 9) или LAG-3 (n = 7) соответственно. Результаты выражаются в количестве копий ВИЧ в миллионах клеток данной подгруппы. Значения P были получены из отрицательного биномиального регрессионного анализа. Значимые различия (p <0,05) выделены жирным шрифтом. Белые кружки представляют предел обнаружения в отрицательных образцах (на основе ввода ячейки).

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005761.g003

Чтобы определить, идентифицируют ли PD-1, TIGIT и LAG-3 клетки, с большей вероятностью несущие стойкий ВИЧ у участников с подавленным вирусом, индивидуальная память CD4 ⁺ Подмножества Т-клеток были отсортированы на основе их экспрессии PD-1, TIGIT или LAG-3 в подгруппе субъектов, перенесших лейкаферез (когорта 2: клинические характеристики в таблице 1), и результаты были проанализированы с помощью модели отрицательной биномиальной регрессии (S5 Таблица).Частота клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, была умеренно выше в PD-1, экспрессирующем T _TM, по сравнению с их отрицательными аналогами по PD-1 (p = 0,053, разность в разы = 1,5) (рис. 3D). Клетки T _EM, экспрессирующие TIGIT, были обогащены интегрированными геномами по сравнению с их аналогами TIGIT ^— (p = 0,001, разность в разы = 2,7) (фиг. 3E). Наконец, все подмножества Т-клеток CD4 ⁺ памяти (T _CM, T _TM и T _EM клетки), экспрессирующие LAG-3, были обогащены интегрированной ДНК ВИЧ по сравнению с их отрицательными аналогами (p <0 .0001, кратная разница = 1,9, p = 0,003, кратная разница = 1,8 и p = 0,030, кратная разница = 2,5 соответственно) (рис. 3F). Все вместе эти результаты показывают, что PD-1, TIGIT и LAG-3 обогащают инфицированные клетки различными субпопуляциями CD4 ⁺ Т-клеток памяти у лиц, получающих АРТ. Мы рассчитали вклад клеток, экспрессирующих PD-1, TIGIT или LAG-3, в общий резервуар, принимая во внимание частоту этих подмножеств в компартменте CD4 и их относительную частоту инфицирования.Средние вклады CD4 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, составили 29%, 34% и 31% соответственно (S2 фиг.). В качестве средства сравнения клетки T _CM, T _TM и T _EM составляли 43%, 27% и 24% пула инфицированных клеток у тех же людей с подавленным вирусом. Эти данные показывают, что треть резервуара заключена в клетках, экспрессирующих каждый индивидуальный маркер.

Совместная экспрессия PD-1, TIGIT и LAG-3 приводит к значительному обогащению ВИЧ-инфицированных CD4 Т-клеток памяти

⁺ Т-лимфоцитов во время АРТ

Затем мы определили, будет ли комбинация PD-1, TIGIT и LAG-3 дополнительно обогащать Т-клетки памяти CD4 ⁺ для ВИЧ-инфицированных клеток во время АРТ.Средняя частота клеток, экспрессирующих 0, 1, 2 или 3 из этих маркеров в Т-компартменте CD4 ⁺ памяти (CD45RA-) из нашей когорты из 48 человек (Таблица 1), показала, что в среднем 33% памяти CD4 ⁺ Т-клетки экспрессировали только один из 3 IC, 12% экспрессировали 2 и 2% экспрессировали 3 маркера одновременно. Большое количество Т-клеток памяти CD4 ⁺ было отсортировано на основе их экспрессии PD-1, TIGIT и LAG-3 от 5 человек. Комбинация этих 3 маркеров позволила нам отсортировать восемь подмножеств клеток до высокой степени чистоты, а именно PD-1 / TIGIT / LAG-3 triple -, PD-1 single +, TIGIT single +, LAG-3 single +, PD-1. / TIGIT double +, TIGIT / LAG-3 double +, PD-1 / LAG-3 double + и PD-1 / TIGIT / LAG-3 triple + ячейки.Частоту клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, измеряли с помощью кПЦР в каждой отсортированной подгруппе (S3 фиг.), А среднюю частоту для каждой категории рассчитывали относительно общего количества CD4 ⁺ Т-клеток (фиг. 4B). Память CD4 ⁺ Т-клетки показали постепенное обогащение ВИЧ-инфицированных клеток при экспрессии увеличивающегося количества IC. Память CD4 ⁺ Т-клетки, одновременно экспрессирующие PD-1, TIGIT и LAG-3, были обогащены ВИЧ-инфицированными клетками до 10 раз больше по сравнению с общим количеством Т-клеток CD4 ⁺ со средним кратным увеличением (IQR) 8.15 (4,92–9,59). Эти результаты продемонстрировали, что Т-клетки памяти CD4 ⁺, экспрессирующие комбинацию IC, были сильно обогащены интегрированной ДНК ВИЧ во время АРТ.

Рис. 4. Совместная экспрессия PD-1, TIGIT и LAG-3 позволяет идентифицировать ВИЧ-инфицированные клетки во время АРТ.

(A) Круговая диаграмма, представляющая частоты Т-клеток памяти CD4 ⁺, коэкспрессирующих PD-1 и / или TIGIT и / или LAG-3 в когорте 1 (n = 48). Цветными полосами справа обозначены категории клеток, экспрессирующих ИС: Тройные -: PD-1 / TIGIT / LAG-3 тройные — синим цветом; одиночный +: одиночный + PD-1, одиночный + TIGIT +, одиночный LAG-3 + зеленого цвета; двойной +: PD-1 / TIGIT двойной +, TIGIT / LAG-3 двойной +, PD-1 / LAG-3 двойной + оранжевый и тройной +: PD-1 / TIGIT / LAG-3 тройной + красный.(B) Частота памяти CD4 ⁺ Т-клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, представленная как кратное изменение частоты в общем количестве CD4 ⁺ Т-клеток. Представлены средние значения и стандартные отклонения от 5 независимых доноров (n = 5). (C) Частота клеток, несущих индуцибельную мсРНК, измеренная с помощью TILDA в Т-клетках памяти CD4 ⁺, экспрессирующих любые (т.е. по крайней мере, одну) по сравнению с отсутствием PD-1, TIGIT или LAG-3 (mLPT + и mLPT- соответственно). Значение P и кратная разница были получены из модели максимального правдоподобия.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005761.g004

Поскольку большинство геномов ВИЧ, даже если они интегрированы, являются дефектными [40], мы оценили, идентифицируют ли PD-1, TIGIT и LAG-3 клетки в котором может быть индуцирована продукция ВИЧ. Поскольку частота тройных положительных клеток была слишком низкой для проведения этого эксперимента, мы отсортировали CD4 ⁺ Т-клетки памяти (CD45RA-), экспрессирующие любой (то есть хотя бы один), по сравнению с отсутствием PD-1, TIGIT или LAG-3 (mLPT + и mLPT- соответственно). Мы измерили частоту клеток в каждой популяции, которые транскрибируют многократно сплайсированные молекулы РНК ВИЧ после индукции с помощью PMA / иономицина, с использованием анализа Tat / rev, индуцированного ограничивающим разведением (TILDA) [36].Транскрипты Tat / rev были обнаружены с помощью TILDA в обоих клеточных субпопуляциях от всех 8 испытуемых индивидуумов. Уровень индуцибельного вируса на миллион клеток был оценен в нашей модели максимального правдоподобия в среднем в 3,0 раза выше в клетках mLPT +, чем в клетках mLPT- от того же участника (95% ДИ от 1,0 до 9,0, p = 0,049, S1C Text) (рис. 4С). Принимая во внимание частоту этих подмножеств клеток, был рассчитан вклад клеток, экспрессирующих по крайней мере один из этих маркеров, в общий пул Т-клеток памяти CD4 ⁺, инфицированных индуцибельными геномами ВИЧ.Этот вклад колебался от 30 до 98% (медиана 76%), указывая на то, что большинство индуцибельных геномов ВИЧ было обнаружено в Т-клетках памяти CD4 ⁺, экспрессирующих по крайней мере один из этих маркеров. Эти эксперименты предоставляют доказательства того, что Т-клетки памяти CD4 ⁺, экспрессирующие PD-1, TIGIT и / или LAG-3, обогащены ВИЧ-инфицированными CD4 ⁺ Т-клетками, несущими индуцибельные провирусы во время АРТ.

Обсуждение

В этом исследовании мы определили PD-1, TIGIT и LAG-3 как новые маркеры клеток, которые чаще инфицируются у ВИЧ-инфицированных лиц, получающих супрессивную АРТ.Совместная экспрессия 3 IC идентифицировала уникальное подмножество CD4 ⁺ Т-клеток, которое было тесно связано с размером резервуара ВИЧ и которое было высоко обогащено интегрированной ДНК ВИЧ. Наконец, наши результаты свидетельствуют о том, что Т-клетки памяти CD4 ⁺, экспрессирующие по крайней мере один из этих маркеров, вносят основной вклад в пул индуцибельных геномов ВИЧ во время АРТ.

Частоты CD4 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих PD-1, CTLA-4, LAG-3 и TIM-3, были аналогичны частотам, о которых сообщали другие группы [41–44], что указывает на то, что когорта участников, использованных для этого исследования скорее всего, будет репрезентативным для населения ВИЧ, получающего супрессивную АРТ.Кроме того, связь между экспрессией PD-1 и TIGIT на Т-лимфоцитах CD4 ⁺ и частотой Т-лимфоцитов CD4 ⁺, несущих провирусы ВИЧ, согласуется с ранее опубликованными результатами [6,24,41].

Мы обнаружили положительную связь между экспрессией PD-1, LAG-3 и TIGIT в Т-клетках CD4 ⁺ и частотой клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ. Следует отметить, что эти три маркера показали самую сильную обратную связь с количеством CD4 ⁺ Т-клеток среди 7 исследованных нами маркеров, что свидетельствует о связи между гомеостазом Т-клеток и персистенцией ВИЧ (S4A, S4B и S4C, рис.).Связь между индивидуальной экспрессией IC и маркером персистенции ВИЧ была значительно меньше и перестала быть статистически значимой после поправки на текущее количество Т-клеток CD4 ⁺. Эти результаты моделей отрицательной биномиальной регрессии предполагают, что текущее количество CD4 ⁺ Т-клеток является важным предиктором размера резервуара ВИЧ, если измерять его как частоту клеток, несущих провирусные геномы [6,37]. Важно отметить, что в отличие от клеток, экспрессирующих один маркер, частота клеток, коэкспрессирующих одновременно PD-1, TIGIT и LAG-3, была тесно связана с размером резервуара и оставалась после корректировки на надир и текущий CD4 ⁺ Подсчет Т-лимфоцитов.Этот результат подтверждает возможность прямой — и, возможно, синергической — роли этих молекул в сохранении ВИЧ во время АРТ. Кроме того, частота CD4 ⁺ Т-клеток, коэкспрессирующих одновременно PD-1, TIGIT и LAG-3, положительно коррелировала с частотой CD4 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих HLADR / CD38 (p = 0,003, r = 0,42). и Ki67 (p = 0,022, r = 0,33) (S1D и S1E Text и S4D и S4E Fig). Эти ассоциации предполагают, что сохранение небольшого пула клеток, экспрессирующих 3 маркера, связано с активацией и пролиферацией Т-клеток.

Интересно, что мы наблюдали сильную отрицательную связь между экспрессией CD160 и кругами 2-LTR. Примечательно, что эта корреляция сохранилась после поправки на текущее и минимальное количество Т-лимфоцитов CD4 ⁺. Возможное объяснение этих результатов заключается в том, что клетки CD160 ⁺ могут быть предпочтительными мишенями для инфекции и истощения во время АРТ, что объясняет сильную отрицательную связь между частотой Т-клеток CD160 ⁺ CD4 ⁺ и предполагаемым маркером стойкая вирусная репликация.

Путем сортировки клеток T _CM, T _TM и T _EM, экспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, мы обнаружили, что клетки, экспрессирующие эти маркеры, были обогащены ВИЧ-инфицированными клетками с различной памятью CD4 ⁺ Субпопуляции Т-клеток во время АРТ. В то время как LAG-3 обогащен интегрированной ДНК ВИЧ во всех подмножествах памяти (T _CM, T _TM и T _EM), PD-1 и TIGIT обогащены геномами ВИЧ исключительно T _TM и T _EM. ячеек соответственно.Эти наблюдения предполагают, что ICs могут оказывать разные пролатентные эффекты в подмножествах, наделенных отчетливым пролиферативным статусом и статусом активации. Можно предположить, что разные IC предоставляют инфицированным клеткам различное селективное преимущество для сохранения путем противодействия различным стимулам, специфичным для индивидуального подмножества клеток памяти. Потребуются дальнейшие исследования, чтобы охарактеризовать механизмы, с помощью которых эти ИК могут конкретно способствовать сохранению ВИЧ в этих различных подгруппах.

В целом, большинство индуцибельных геномов ВИЧ было обнаружено в Т-клетках памяти CD4 ⁺, экспрессирующих по крайней мере один из этих маркеров (медиана 76%).Хотя тройные отрицательные клетки также содержат индуцибельные геномы ВИЧ, наши данные свидетельствуют о том, что существует обогащение индуцибельных вирусных геномов в CD4 ⁺ Т-клетках, экспрессирующих эти маркеры.

Важно отметить, что мы обнаружили постепенное обогащение интегрированной ДНК ВИЧ в клетках, которые одновременно экспрессируют несколько IC. Это наблюдение отражает синергетические механизмы действия этих рецепторов на подавление функций Т-клеток. В самом деле, LAG-3 и PD-1 обычно коэкспрессируются на истощенных или дисфункциональных Т-клетках в моделях хронических инфекций [45], аутоиммунных заболеваний [46] и рака [47, 48].Возможные синергетические функции были выделены на мышиных моделях аутоиммунных заболеваний [49]. MAb, блокирующее LAG-3, недавно вошло в клинические испытания для лечения рака в виде монотерапии или в комбинации с анти-PD-1 (NCT01968109). Кроме того, TIGIT коэкспрессируется с PD-1 на активированных CD8 ⁺ инфильтрирующих опухоль лимфоцитах пациентов с меланомой [50]. Блокирование TIGIT и PD-1 синергетически улучшает пролиферацию Т-клеток, продукцию цитокинов и дегрануляцию in vivo, при лечении меланомы и in vitro, при ВИЧ-инфекции [24,50].Все вместе эти исследования показывают, что ИК могут синергетически подавлять функции Т-лимфоцитов, и предполагают, что этот синергизм также может играть роль в сохранении ВИЧ во время АРТ.

Экспрессия PD-1, LAG-3 и TIM-3 на CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клетках до начала АРТ была недавно определена как надежный предиктор времени до вирусного восстановления после прерывания лечения в исследовании SPARTAC [ 43]. Возможно, что CD4 ⁺ Т-клетки, экспрессирующие эти маркеры до АРТ, представляют собой предпочтительную нишу для создания стабильного резервуара для ВИЧ, и что латентно инфицированные клетки, экспрессирующие эти маркеры, предпочтительно сохраняются во время АРТ, как предполагают наши наблюдения.В нашем исследовании мы определили дискретную подгруппу CD4 ⁺ Т-клеток, коэкспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, в качестве важного предиктора частоты клеток, несущих интегрированную ДНК ВИЧ, во время АРТ. Следует отметить, что экспрессия TIGIT до начала АРТ не измерялась в исследовании SPARTAC, и потребуются дальнейшие исследования, чтобы определить, может ли этот ИК также служить предиктором повторного распространения вируса до АРТ.

Наши данные служат обоснованием для использования блокаторов иммунных контрольных точек (ICB) для нацеливания на латентно инфицированные клетки во время АРТ.Нацеливание на IC с помощью ICB, нового класса молекул, разрабатываемых в онкологии, может иметь двойную пользу в контексте ремиссии ВИЧ, как нацеливание на латентно инфицированные клетки, так и восстановление ВИЧ-специфического Т-клеточного иммунитета. Усиливая активацию Т-клеток и увеличивая вирусную транскрипцию, ICB могут способствовать реактивации ВИЧ в латентно инфицированных клетках при использовании отдельно или в сочетании с агентами, обращающими латентный период. Анти-CTLA-4 антитело иплимумаб, как недавно было показано, значительно увеличивает CA-US РНК ВИЧ у ВИЧ-инфицированного человека, получающего АРТ, что согласуется с изменением латентности [51].Альтернативный механизм действия некоторых ICB может заключаться в прямом истощении клеток, экспрессирующих эти маркеры, как это наблюдается с ипилумимабом против CTLA-4, который индуцирует прямую элиминацию CTLA-4 ⁺ регуляторных Т-клеток в опухолевой ткани у пациентов с меланомой. [52]. Наши результаты показывают, что введение антител с эффекторными функциями, нацеленных на PD-1, LAG-3 и TIGIT, может значительно уменьшить размер латентного резервуара ВИЧ во время АРТ за счет нацеливания на клетки, в которых сохраняется ВИЧ.

С нашим исследованием связано несколько ограничений. Мы не корректировали p-значения для множественных сравнений, потому что такая корректировка пренебрегала бы биологическими взаимосвязями между нашими положительными результатами и потребовала бы, чтобы каждый анализ отвлекал от других, а не усиливал друг друга, когда существует биологическая согласованность [53] (S1F Text ). Тем не менее, наши доказательства могут быть слабее, чем если бы они были получены в результате более узкого набора анализов, и, в любом случае, потребуются дополнительные исследования для подтверждения гипотез, поддерживаемых нашими результатами.Большинство наших анализов было выполнено с использованием интегрированной ДНК ВИЧ в качестве маркера устойчивости ВИЧ. Мы выбрали этот результат, так как он применим к небольшим подмножествам CD4 ⁺ Т-клеток, на которых невозможно измерить репликацию компетентного ВИЧ. Известно, что большинство вирусных геномов, сохраняющихся во время ВРТ, являются дефектными [40,54], и хотя наши эксперименты показывают, что клетки, экспрессирующие IC, могут продуцировать многократно сплайсинговую РНК при активации (TILDA), они не демонстрируют, что репликационно-компетентный вирус сохраняется в эти клетки.Кроме того, наши результаты ограничиваются циркулирующими Т-клетками. Возможно и действительно вероятно, что биология экспрессии ICs и персистенции ВИЧ будет различаться в тканях, особенно во вторичных лимфоидных тканях, где, вероятно, будут экспрессироваться многие из лигандов для этих рецепторов.

Лучшее понимание природы клеток, которые охватывают латентный резервуар ВИЧ, является предпосылкой для разработки новых лечебных стратегий. Несмотря на сходство в механизмах действия, PD-1, TIGIT и LAG-3, вероятно, не будут избыточными по своим функциям.Одновременное блокирование этих путей может показать синергизм в обращении латентного периода, о чем свидетельствует их синергетическая активность в восстановлении Т-клеточного иммунитета.

Вспомогательная информация

S1 Рис. Стратегия стробирования 7 IC на CD4

⁺ Т-лимфоцитах.

Экспрессия PD-1, CTLA-4, LAG-3, TIGIT, TIM-3, CD160 и 2B4 на CD4 ⁺ Т-лимфоцитах у лиц, получающих супрессивную АРТ (n = 48). Репрезентативные точечные графики от одного участника.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.ppat.1005761.s002

(EPS)

S2 Рис. Вклад клеток, экспрессирующих IC, в резервуарный пул ВИЧ.

Вклад клеток, экспрессирующих PD-1 (A), TIGIT (B) или LAG-3 (C) в общий резервуар ВИЧ, с учетом частоты этих подмножеств в компартменте CD4 и их относительной частоты инфицирования (n = 12, n = 9 и n = 7 соответственно). Горизонтальные полосы указывают средние значения.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005761.s003

(EPS)

S3 Рис. Частота памяти CD4

⁺ Т-клетки, несущие интегрированную ДНК ВИЧ в PD-1 / TIGIT / LAG-3 triple– (LPT-), PD-1 single + (P), TIGIT single + (T), LAG-3 одиночный + (L), PD-1 / TIGIT двойной + (PT), TIGIT / LAG-3 двойной + (LT), PD-1 / LAG-3 двойной + (LP) и PD-1 / TIGIT / LAG-3 triple + (LPT +) клетки.

Необработанные данные от 5 субъектов, представленных на рис. 4В.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005761.s004

(EPS)

S4 Фиг.PD-1, TIGIT и LAG-3 связаны с маркерами активации / пролиферации.

(A), (B), (C) Связь между текущим количеством CD4 ⁺ Т-клеток и частотой CD4 ⁺ Т-клеток, экспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, соответственно. Значения P, r были получены из ранжированного анализа Спирмена. (D), (E) Связь между частотой CD4 ⁺ T-клеток, коэкспрессирующих PD-1, TIGIT и LAG-3, и частотами CD4 ⁺ T-клеток, экспрессирующих HLA-DR / CD38 и Ki67 соответственно.Значения P, r были получены из ранжированного анализа Спирмена.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005761.s005

(EPS)

Благодарности

Авторы благодарят участников, которые щедро пожертвовали образцы для этого исследования, а также Clinical Core в UCSF за набор пациентов и сбор образцов. Авторы благодарят Патрика Ерамяна, Моти Рамгопала, Ребеку Борди, Бренду Джейкобс и Кэтирин Пенниман за набор и клиническую помощь участникам исследования, а также Аманду МакНалти и Стефани Сантос за техническую помощь.Мы также благодарим сотрудников Flow Core в UCSF, VGTI Florida (Yu Shi и Kim Kusser) и CRCHUM (Dominique Gauchat и Annie Gosselin) за сортировку клеток. Авторы благодарят Марту Массанеллу и членов Кливлендского консорциума иммунопатогенеза за советы и полезные обсуждения.

Вклад авторов

Эксперимент задумал и спроектировал: RF SGD SRL RPS NC. Проведены эксперименты: РФ ВБ МБЛ ГК СД МК. Проанализированы данные: РФ ВН ПБ МК ЛЭ РЗ ЭС ФМХ. Написал статью: RF PB SGD SRL RPS NC.

Список литературы

1. Перельсон А.С., Эссунгер П., Цао Й., Весанен М., Херли А., Саксела К. и др. Характеристики распада ВИЧ-1-инфицированных компартментов во время комбинированной терапии. Природа. 1997; 387: 188–191. pmid: 9144290
2. Палелла Ф.Дж., Делани К.М., Мурман А.С., Лавлесс М.О., фюрер Дж., Саттен Г.А. и др. Снижение заболеваемости и смертности среди пациентов с запущенной инфекцией вируса иммунодефицита человека. Исследователи амбулаторных исследований ВИЧ. N Engl J Med.1998. 338: 853–860. pmid: 9516219
3. Дэйви Р.Т., Бхат Н., Йодер С., Чун Т.В., Меткалф Дж. А., Дьюар Р. и др. Динамика ВИЧ-1 и Т-лимфоцитов после прекращения высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ) у пациентов с устойчивой вирусной супрессией в анамнезе. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1999; 96: 15109–15114. pmid: 10611346
4. Чун Т.В., Юстемент Дж. С., Мюррей Д., Халлахан К. В., Маенза Дж., Коллиер А. С. и др. Возврат плазменной виремии после прекращения антиретровирусной терапии, несмотря на крайне низкие уровни резервуара ВИЧ: последствия для искоренения.СПИД. 2010; 24: 2803–2808. pmid: 20962613
5. Научная рабочая группа Международного общества СПИДа по лечению ВИЧ, Дикс С.Г., Отран Б., Беркхаут Б., Бенкиран М., Кернс С. и др. На пути к излечению от ВИЧ: глобальная научная стратегия. Издательская группа «Природа». 2012; 12: 607–614.
6. Хомонт Н., Эль-Фар М, Анкута П., Траутманн Л., Прокопио Ф.А., Яссин-Диаб Б. и др. Размер и устойчивость резервуара ВИЧ обусловлены выживаемостью Т-клеток и гомеостатической пролиферацией. Издательская группа «Природа».Издательская группа «Природа»; 2009 ;: 1–9.
7. Buzon MJ, Sun H, Li C, Shaw A, Seiss K, Ouyang Z и др. Персистенция ВИЧ-1 в CD4 + Т-клетках со свойствами стволовых клеток. Природная медицина. 2014. 20: 139–142. pmid: 24412925
8. Джаафура С., де Гоэр де Эрве М.Г., Эрнандес-Варгас Е.А., Хендель-Чавес Х., Абдох М., Матео М.С. и др. Прогрессивное сокращение латентного резервуара ВИЧ вокруг ядра менее дифференцированных CD4 Т-клеток памяти. Nat Commun. 2014; 5: 5407.pmid: 25382623
9. Госселин А., Монтейро П., Чомонт Н., Диас-Грифферо Ф., Саид Э.А., Фонсека С. и др. CCR4 + CCR6 + и CXCR3 + CCR6 + CD4 + Т-клетки периферической крови очень восприимчивы к инфекции ВИЧ-1. J Immunol. 2010. 184: 1604–1616. pmid: 20042588
10. Монтейро П., Госселин А., Ваклече В.С., Эль-Фар М., Саид Е.А., Каред Х. и др. Память CCR6 + CD4 + Т-клетки являются предпочтительными мишенями для продуктивной ВИЧ-инфекции типа 1, независимо от экспрессии в них интегрина {бета} 7.J Immunol. 2011; 186: 4618–4630. pmid: 21398606
11. Sun H, Kim D, Li X, Kiselinova M, Ouyang Z, Vandekerckhove L и др. Th2 / 17-поляризация CD4-Т-клеток поддерживает сохранение ВИЧ-1 во время антиретровирусной терапии. J Virol. 2015; 89: 11284–11293. pmid: 26339043
12. Хури Дж., Андерсон Дж. Л., Фроментин Р., Хартогенсис В., Смит М. З., Баккетти П. и др. Сохранение интегрированной ДНК ВИЧ в CXCR3 + CCR6 + CD4 + Т-клетки памяти у ВИЧ-инфицированных лиц, получающих антиретровирусную терапию.СПИД. 2016; Публикация перед печатью: 1.
13. Гринвальд Р.Дж., Фриман Г.Дж., Шарп А.Х. Возвращение к семейству B7. Анну Рев Иммунол. 2005; 23: 515–548. pmid: 15771580
14. Траутманн Л., Джанбазиан Л., Чомонт Н., Саид Э.А., Гиммиг С., Бессетт Б. и др. Повышение экспрессии PD-1 на ВИЧ-специфических CD8 + Т-клетках приводит к обратимой иммунной дисфункции. Природная медицина. 2006; 12: 1198–1202. pmid: 16917489
15. Day CL, Kaufmann DE, Kiepiela P, Brown JA, Moodley ES, Reddy S и др.Экспрессия PD-1 на ВИЧ-специфических Т-клетках связана с истощением Т-клеток и прогрессированием заболевания. Природа. 2006. 443: 350–354. pmid: 16921384
16. Петровас С., Касазза Дж. П., Бренчли Дж. М., Прайс Д. А., Гостик Е., Адамс В. К. и др. PD-1 является регулятором выживаемости вирус-специфичных CD8 + Т-клеток при ВИЧ-инфекции. J Exp Med. 2006; 203: 2281–2292. pmid: 16954372
17. Поричис Ф., Квон Д.С., Зупкоски Дж., Тайге Д.П., МакМаллен А., Брокман М.А. и др. Реагирование ВИЧ-специфических CD4 Т-клеток на блокаду PD-1.Кровь. 2011; 118: 965–974. pmid: 21652684
18. Фриман Г.Дж., Лонг А.Дж., Иваи Й., Бурк К., Чернова Т., Нишимура Х. и др. Вовлечение иммуноингибиторного рецептора PD-1 новым членом семейства B7 приводит к отрицательной регуляции активации лимфоцитов. J Exp Med. 2000; 192: 1027–1034. pmid: 11015443
19. Картер Л., Фоузер Л.А., Юссиф Дж., Фитц Л., Дэн Б., Вуд CR и др. PD-1: Путь ингибирования PD-L влияет как на CD4 (+), так и на CD8 (+) Т-клетки и преодолевается IL-2.Eur J Immunol. 2002; 32: 634–643. pmid: 11857337
20. D’Souza M, Fontenot AP, Mack DG, Lozupone C, Dillon S, Meditz A и др. Экспрессия запрограммированной смерти 1 на ВИЧ-специфических CD4 + Т-клетках управляется вирусной репликацией и связана с дисфункцией Т-клеток. J Immunol. 2007; 179: 1979–1987. pmid: 17641065
21. Cockerham LR, Jain V, Sinclair E, Glidden DV, Hartogenesis W., Hatano H, et al. Экспрессия запрограммированной смерти-1 на CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клетках при лечении и нелеченом заболевании ВИЧ.СПИД. 2014; 28: 1749–1758. pmid: 24871455
22. Левин С.Д., Тафт Д.В., Брандт С.С., Бухер С., Ховард Э.Д., Чедвик Е.М. и др. Vstm3 является членом семейства CD28 и важным модулятором функции Т-клеток. Eur J Immunol. 2011; 41: 902–915. pmid: 21416464
23. Yu X, Harden K, Gonzalez LC, Francesco M, Chiang E, Irving B и др. Поверхностный белок TIGIT подавляет активацию Т-клеток, способствуя образованию зрелых иммунорегуляторных дендритных клеток. Иммунология природы.2009. 10: 48–57. pmid: 1
27
24. Chew GM, Fujita T, Webb GM, Burwitz BJ, Wu HL, Reed JS и др. TIGIT маркирует истощенные Т-клетки, коррелирует с прогрессированием заболевания и служит мишенью для восстановления иммунитета при ВИЧ и инфекции SIV. PLoS Pathog. 2016; 12: e1005349. pmid: 26741490
25. Ямамото Т., Прайс Д.А., Казазза Дж. П., Феррари Дж., Насон М., Чаттопадхьяй П.К. и др. Паттерны поверхностной экспрессии негативных регуляторных молекул определяют детерминанты вирус-специфического истощения CD8 + Т-клеток при ВИЧ-инфекции.Кровь. 2011; 117: 4805–4815. pmid: 21398582
26. Хуард Б., Мастранджели Р., Приджент П., Брюникель Д., Донини С., Эль-Тайар Н. и др. Характеристика сайта связывания класса II главного комплекса гистосовместимости на белке LAG-3. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1997; 94: 5744–5749. pmid: 9159144
27. Хуанг C-T, Уоркман CJ, Flies D, Pan X, Marson AL, Zhou G и др. Роль LAG-3 в регуляторных Т-клетках. Иммунитет. 2004. 21: 503–513. pmid: 15485628
28. Workman CJ, Vignali DAA.Отрицательная регуляция гомеостаза Т-клеток геном активации лимфоцитов-3 (CD223). J Immunol. 2005. 174: 688–695. pmid: 15634887
29. Jones RB, Ndhlovu LC, Barbour JD, Sheth PM, Jha AR, Long BR, et al. Экспрессия Tim-3 определяет новую популяцию дисфункциональных Т-клеток с очень высокими частотами при прогрессирующей инфекции ВИЧ-1. J Exp Med. 2008; 205: 2763–2779. pmid: 1
39
30. Кассу А., Маркус Р.А., Д’Суза М.Б., Келли-Макнайт Е.А., Голден-Мейсон Л., Аккина Р. и др.Регуляция вирус-специфической функции CD4 + Т-клеток множеством костимулирующих рецепторов во время хронической ВИЧ-инфекции. J Immunol. 2010; 185: 3007–3018. pmid: 20656923
31. Цай Дж., Анумантан А., Браун Дж. А., Гринфилд Е. А., Чжу Б., Фриман Дж. Дж. CD160 ингибирует активацию CD4 + Т-клеток человека посредством взаимодействия с медиатором проникновения вируса герпеса. Иммунология природы. 2008. 9: 176–185. pmid: 18193050
32. Peretz Y, He Z, Shi Y, Yassine-Diab B, Goulet J-P, Bordi R и др.Совместная экспрессия CD160 и PD-1 на ВИЧ-специфических Т-лимфоцитах CD8 определяет подгруппу с развитой дисфункцией. PLoS Pathog. 2012; 8: e1002840. pmid: 22916009
33. Kaplan RC, Sinclair E, Landay AL, Lurain N, Sharrett AR, Gange SJ, et al. Активация и старение Т-клеток предсказывают субклиническое заболевание сонной артерии у ВИЧ-инфицированных женщин. J Infect Dis. 2011; 203: 452–463. pmid: 21220772
34. Vandergeeten C, Fromentin R, Merlini E, Lawani MB, DaFonseca S, Bakeman W и др.Сверхчувствительные кросс-клада-тесты на основе ПЦР для измерения устойчивости ВИЧ в исследованиях с большой группой. J Virol. 2014. 88: 12385–12396. pmid: 25122785
35. Elliott JH, McMahon JH, Chang CC, Lee SA, Hartogensis W, Bumpus N и др. Кратковременное назначение дисульфирама для лечения латентной ВИЧ-инфекции: исследование фазы 2 с увеличением дозы. Ланцет ВИЧ. 2015; 2: e520–9. pmid: 26614966
36. Procopio FA, Fromentin R, Kulpa DA, Brehm JH, Bebin A-G, Strain MC и др.Новый тест для измерения уровня индуцируемого вирусного резервуара у ВИЧ-инфицированных. EBioMedicine. 2015; 2: 872–881.
37. Булассель М. Р., Чомонт Н., Пай Н. П., Гилмор Н., Секали Р. П., Роути Дж. П. Надир CD4 Т-лимфоцитов независимо предсказывает величину резервуара ВИЧ после продолжительной супрессивной антиретровирусной терапии. J Clin Virol. 2012; 53: 29–32. pmid: 22019250
38. Chun T-W, Justement JS, Pandya P, Hallahan CW, McLaughlin M, Liu S и др.Взаимосвязь между размером резервуара вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) в CD4 + Т-клетках периферической крови и соотношением CD4 +: CD8 + Т-лимфоцитов у людей с вирусом иммунодефицита человека, инфицированных ВИЧ-1, получающих длительную высокоактивную антиретровирусную терапию. J Infect Dis. 2002; 185: 1672–1676. pmid: 12023777
39. Morou A, Palmer BE, Kaufmann DE. Особенности дисфункции CD4 + Т-лимфоцитов при хронических вирусных инфекциях. Curr Opin ВИЧ СПИД. 2014; 9: 446–451. pmid: 25023623
40.Хо И-К, Шан Л., Хосман Н.Н., Ван Дж., Ласки С.Б., Розенблум ДИС и др. Компетентные к репликации неиндуцированные провирусы в латентном резервуаре повышают барьер на пути лечения ВИЧ-1. Клетка. 2013; 155: 540–551. pmid: 24243014
41. Хатано Х., Джайн Ви, Хант П.В., Ли Т.Х., Синклер Э., До Т.Д. и др. Клеточные показатели устойчивости вируса связаны с активацией иммунной системы и экспрессией белка 1 (PD-1) CD4 + Т-клеток, экспрессирующего белок запрограммированной гибели клеток. J Infect Dis. 2013; 208: 50–56. pmid: 23089590
42.Юкл С.А., Шергилл А.К., Гирлинг В., Ли К., Киллиан М., Эплинг Л. и др. Сайт-специфические различия в частотах и фенотипах Т-лимфоцитов в крови и кишечнике ВИЧ-инфицированных и принимающих АРТ взрослых ВИЧ-положительных. PLoS ONE. 2015; 10: e0121290. pmid: 25811360
43. Херст Дж., Хоффманн М., Пейс М., Уильямс Дж. П., Торнхилл Дж., Хэмлин Э. и др. Иммунологические биомаркеры позволяют прогнозировать рецидив вируса ВИЧ-1 после прерывания лечения. Nat Commun. 2015; 6: 8495. pmid: 26449164
44. Валиафан Р., Мигес М.Дж., Патель Б., Архарт К.Л., Астана Д.Табакокурение увеличивает активацию иммунной системы и ухудшает функцию Т-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов, принимающих антиретровирусные препараты: кросс-секционное пилотное исследование. PLoS ONE. 2014; 9: e97698. pmid: 24842313
45. Блэкберн С.Д., Шин Х., Хайнинг В.Н., Цзоу Т., Уоркман С.Дж., Полли А. и др. Коррекция истощения CD8 + Т-клеток множеством ингибирующих рецепторов во время хронической вирусной инфекции. Иммунология природы. 2009; 10: 29–37. pmid: 118
46. Гроссо Дж. Ф., Голдберг М. В., Гетнет Д., Бруно Т. С., Йен Х. Р., Пайл К. Дж. И др.Функционально различные подмножества LAG-3 и PD-1 на активированных и хронически стимулированных Т-клетках CD8. J Immunol. 2009; 182: 6659–6669. pmid: 19454660
47. Мацузаки Дж., Гнджатик С., Мхавеч-Фауселья П., Бек А., Миллер А., Цуджи Т. и др. Проникающие в опухоль NY-ESO-1 CD8 + Т-клетки отрицательно регулируются LAG-3 и PD-1 при раке яичников человека. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2010; 107: 7875–7880. pmid: 20385810
48. Байтч Л., Легат А., Барба Л., Фуэртес Маррако С.А., Соперники Дж.П., Баумгаертнер П. и др.Расширенная совместная экспрессия ингибирующих рецепторов человеческими CD8 Т-клетками в зависимости от дифференцировки, антиген-специфичности и анатомической локализации. PLoS ONE. 2012; 7: e30852. pmid: 22347406
49. Ву С.Р., Тернис М.Э., Голдберг М.В., Банкоти Дж., Селби М., Ниршл С.Дж. и др. Иммунные ингибирующие молекулы LAG-3 и PD-1 синергетически регулируют функцию Т-клеток, способствуя ускользанию от опухолевого иммунитета. Cancer Res. 2012; 72: 917–927. pmid: 22186141
50. Шовен Ж.М., Пальяно О, Фуркад Дж., Сунь З., Ван Х, Сандер С. и др.TIGIT и PD-1 повреждают опухолевые антиген-специфические CD8 ⁺ Т-клетки у пациентов с меланомой. J Clin Invest. 2015; 125: 2046–2058. pmid: 25866972
51. Вайтман Ф., Соломон А., Кумар С.С., Урриола Н., Галлахер К., Хайнер Б. и др. Влияние ипилимумаба на резервуар ВИЧ у ВИЧ-инфицированного человека с метастатической меланомой. СПИД. 2015; 29: 504–506. pmid: 25628259
52. Романо Э., Кусио-Кобиалка М., Фукас П. Г., Баумгаертнер П., Мейер С., Баллабени П. и др. Ипилимумаб-зависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность регуляторных Т-клеток ex vivo неклассическими моноцитами у пациентов с меланомой.Proc Natl Acad Sci U S. A. 2015; 112: 6140–6145. pmid: 25918390
53. Баккетти П. Экспертная оценка статистики в медицинских исследованиях: другая проблема. BMJ. 2002; 324: 1271–1273. pmid: 12028986
54. Eriksson S, Graf EH, Dahl V, Strain MC, Yukl SA, Lysenko ES, et al. Сравнительный анализ показателей вирусных резервуаров в исследованиях эрадикации ВИЧ-1. PLoS Pathog. 2013; 9: e1003174. pmid: 23459007